HPLC法测定当归拈痛丸中甘草酸铵含量.docVIP

HPLC法测定当归拈痛丸中甘草酸铵含量[摘 要]目的 建立测定当归拈痛丸甘草酸铵的分析方法。方法 采用Kromasil C18 色谱柱；流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液（磷酸调pH 3.0 ），检测波长 238 nm；流速 1.0mL#8226;min-1。结果 甘草酸铵在：20.86～166.88μg#8226;mL-1的范围内线性关系良好，平均回收率为99.67%。结论 本法简便、准确、重现性好，可用于当归拈痛丸中甘草酸铵的测定。 关键词：HPLC 当归拈痛丸 甘草酸铵 中图分类号:R927.1 文献标识码:A 文章编号：1004-7484（2011）04-0110-02 当归拈痛丸由甘草等十五味中药组成。具有的作用，主治湿热相搏，肢节烦痛，肩背沉重。甘草为调和诸药，其指标成分为甘草酸。为了控制当归拈痛丸的质量，本文采用HPLC方法同时对方中甘草进行测定，方法学考察结果表明，该方法简便、灵敏、准确，重现性好。 1 仪器与试剂 Agilent 1200高效液相分析仪（美国Agilent公司）；METTLER XS205电子分市卸甲仪器厂）甘草酸铵对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110731-200205）；当归拈痛丸（河北万岁药业股份有限公司），甲醇、乙腈为色谱纯；实验室用水为超纯水；其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A为乙腈，B为0.5%三乙胺水溶液（磷酸调pH 3.0 ）（40:60）；流速1 mL#8226;min-1；检测波长238nm；进样量20 μL。在此条件下样品溶液中的各组分达到基线分离；结果阴性对照无干扰，证明此色谱条件可行。对照品溶液、样品溶液、及各阴性溶液的色谱图见图1 2.2 实验溶液制备 2.2.1 对照品溶液 精密称称取甘草酸铵30.18 mg，置20mL量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成对照品溶液储备液。分别精密吸取上述储备液适量至20mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，得75.45μg#8226;mL-1的甘草酸铵对照品混合溶液。 2.2.2 供试品溶液 取本品0.6g，精密称定，置50 mL量瓶中，加含有1%盐酸的甲醇/水（50:50）溶液50mL，超声30min，放冷至室温，加上述溶液至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，既得供试品溶液。 2.2.3 阴性对照溶液 取其处方量的药材，按其制备工艺方法分别制备缺甘草的阴性样品，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液。 2.3线性试验 精密吸取甘草酸铵对照品储备液0.2，0.4，0.5，0.8， 1.6 mL，置10mL量瓶中用50%甲醇稀释至刻度，制成对照品溶液，测定，以峰面积为纵坐标，溶液浓度为横坐标，进行线性回归：Y=1156.5054x-44.3217，r=0.9993 2.3.1 精密度试验精密吸取对照品溶液20 μL，重复进样5次测定，计算甘草酸铵的色谱峰面积，其RSD为1.18%（n=5），表明精密度良好。 2.3.2 重复性试验 精密称取同一批样品5份，同法处理，重复进样测定5次，计算甘草酸铵的含量，其RSD为1.51%。 2.3.3 稳定性试验将供试品溶液在室温贮存，在“2.1”项下色谱条件下，分别于0，2，4，6，8 h进样各测定一次，记录甘草酸铵峰面积，其RSD为2.11%，表明样品在8 h内稳定。 2.3.4 回收率试验 精密称取批号为090302的样品5份，分别置50mL量瓶中，精密加入甘草酸铵对照品0.6mL，按2.2.2项下方法配制，依法测定，回收率为99.67% RSD为2.74% 测定结果见表1 2.4 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备项下方法配制，精密吸取20 μL样品溶液，进样测定，计算各样品甘草酸铵的含量，三批分别为2.17，2.12，2.31 mg/丸。 3 讨论 本实验选择乙腈-0.5%三乙胺水溶液（磷酸调pH 3.0 ）甘草酸在15-21分钟之间出峰，其他杂质峰在35分钟之内全部出完，并与杂质峰能够达到基线分离，方法简单可靠。 参考文献 [1] 国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂第十三册［S］.北京:化学工业出版社，1997：132. 1