建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体mRNA表达影响.docVIP

建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝脏低密度脂蛋白受体mRNA表达影响[摘 要] 目的 观察建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体mRNA的影响。方法 将 84只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、建瓴汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、辛伐他汀组、降脂灵片组7组，观察建瓴汤对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体信使RNA（LDLRmRNA）表达的影响。结果 建瓴汤能显著上调肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝LDLR mRNA表达水平。结论 建瓴汤降脂作用机理可能是通过提高高脂血症大鼠低密度脂蛋白受体基因的表达，从而起到降脂作用。 关键词：高脂血症 肝肾阴虚 低密度脂蛋白受体mRNA 实验研究 中图分类号：R333.4 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2010）11-0008-03 建瓴汤出自张锡纯的《医学衷中参西录》，具有补益肝肾、滋阴潜阳之功，善疗肾阴虚于下，肝阳亢于上诸证，临床上常用于治疗高血压病、冠心病、脑血管意外等疾病。临床观察表明，建瓴汤治疗上述疾病同时，对患者合并的高脂血症及其合并症有较好疗效。前期的动物实验研究结果表明， 建瓴汤可以显著降低高脂血症大鼠血清TC、TG、LDL-C水平，升高血清HDL-C，具有较好的降脂作用[1]。为了从更深层次揭示建瓴汤降脂作用机理， 本实验采用原位杂交法测定研究该方对肝肾阴虚型高脂血症大鼠肝细胞低密度脂蛋白受体信使 RNA（LDLRmRNA ）表达，旨从分子水平揭示该方的降脂作用机理。 1 材料与方法 1.1 材料#61472; 1.1.1 动物 取体重为160～180g 雄性SD大鼠84只，180not;～210 g，由长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供，许可证号：scxk（湘）2006-0001。大鼠分笼饲养，置于温度（25±2）℃，湿度50%～60%的饲养室。动物均自由饮水。 1.1.2 药品 建瓴汤所用中药饮片均购自广西区人民医院门诊，按照制生地黄、白芍、山药、柏子仁各30g，淮牛膝15g，生龙骨，生牡蛎、代赭石各30g（先煎）的比例，药材洗净后一煎加8倍水煎煮40分钟，过滤煎液，二煎加6倍水，煎煮40分钟，过滤煎液，将两次滤液合并，浓缩成每毫升生药含量1.2g，4℃冰箱保存备用；辛伐他汀片购自广西区人民医院门诊，由浙江海正药业股份有限公司生产；降脂灵片购自广西区人民医院门诊，系湖南德海制药有限公司生产；高胆固醇饲料由普通饲料88.7%、胆固醇1%、猪油10%和胆酸钠0.3%组成。由广西中医学院动物实验中心提供。LDLR原位杂交试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。 1.2 方法 1.2.1 动物分组及给药 实验分组与处理取10周龄健康雄性SD大鼠84只，按随机数字表法进行完全随机分成空白对照组、模型对照组、建瓴汤低剂量组、中剂量组、高剂量组、辛伐他汀组、降脂灵片组7 组，每组12只，各组平均体重比较差异无显著性（见表1）。正常组大鼠喂饲普通饲料，其余组喂饲高胆固醇饲料（高胆固醇饲料由普通饲料88.7%、胆固醇1%、猪油10%和胆酸钠0.3%组成）。 1.2.2 动物模型制作 除空白对照组外，其余各组从实验第1天起同时采用长期激怒法[2]造成肝肾阴虚证。在模型复制成功的基础上每日上午模型组、建瓴汤组、降脂灵片组及辛伐他汀组继续给予高脂饮食喂饲并采用长期激怒法，每日下午各给药组按2 ml/100g体重折算。分别予建瓴汤3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg，降脂灵片混悬液0.108 g/kg，辛伐他汀混悬液0.0037 g/kg灌胃，其余两组给予同等剂量的蒸馏水，连续灌胃30天。 1.2.3 指标检测 按照原位杂交的取材操作规程将新鲜的肝组织切成不超过 4mm 的小块，及时固定、脱水、浸蜡、包埋，切片。按照试剂盒说明书操作进行脱蜡、 暴露mRNA核酸片段、后固定、预杂交、杂交等操作，DAB显色、苏木素复染，二甲苯透明，封片。 以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性。每张切片随机取5个高倍镜视野（400倍）， 用北航医学图像分析系统（4.0版本）进行分析，测定原位杂交阳性率（%）。 1.3 统计学处理 数据以均数±标准差（ ）表示，多组间比较用单因素方差分析，组间比较用q检验，以P0.05，与降脂灵片组比较※P0.05）。建瓴汤中剂量组阳性细胞多于降脂灵片组，二者有显著性差异（P 1