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电针对大鼠局灶性脑缺血后神经元损伤保护作用探究△许能贵　易　玮　马勤耘　许冠荪　朱舜丽　陈全珠 (安徽中医学院针灸经络研究所,合肥230038) 摘　要　选择凝闭大鼠大脑中动脉致局灶性脑缺血为模型,观察电针对缺血区各指标的影响。结果:①造模60min后,局部脑血流量(rCBF)、超氧化物歧化酶(SOD)、单胺类神经递质均显著下降;脑组织水含量、丙二醛(MDA)、兴奋性氨基酸(EAA)中谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)明显升高。②电针10min后,上述指标均得到改善。提示电针可升高rCBF、SOD活性和中枢单胺类神经递质,降低MDA、Glu、Asp和脑组织的水含量,从而保护脑缺血后继发性神经元损伤。 主题词　电针　脑缺血/针灸疗法　神经元/针灸效应 脑血管疾病是目前公认的人类三大致死疾病之一,其中缺血性脑血管疾病发病率在我国高达70%,国外高达80%以上。由于脑缺血后神经元损伤一旦达到不可逆阶段,就无法自然修复,后果严重,因而探讨其有效的防治措施和发病机理,是国内外医学研究的热点和重点。本实验选择凝闭大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血为模型,以rCBF、脑组织水含量、SOD、MDA、脑内EAA和单胺类神经递质等为指标,观察电针对其影响,并进一步探讨电针防治缺血性脑损伤的机理。 1　材料和方法 1.1　实验动物 选用健康Wistar大鼠,体重200～300 g,雌雄不拘,由安徽中医学院针灸经络研究所标准动物房提供。将动物随机分为假手术对照组、缺血组、缺血加电针组。 1.2　模型建立 将动物用10%水合氯醛溶液,按400 mg/kg量腹腔麻醉,取右侧向上侧卧位固定,沿耳眼连线中点切开皮肤,分离颞肌,暴露颞骨作一骨窗,轻抬脑,暴露大脑中动脉,用烧红的不锈钢丝轻触大脑中动脉,使之凝闭,清创缝合伤口,待测各项指标。 假手术对照组:只作手术,不凝闭大脑中动脉。 缺血组:造模后60 min将大鼠迅速断头处死,取出大脑,然后按各指标所要求的部分进行分离切割,称重,备用。 缺血加电针组:在缺血60 min后,再电针”大椎”、”百会”穴10 min(穴位定位参照大鼠常用的针灸穴位?[1])。”大椎”穴在第七颈椎与第一胸椎间,背部正中;”百会”穴在顶骨正中。电针应用我所研制的PCE-A型程控电针仪,5～10次/s,疏密波,强度以大鼠轻度颤动为度,时间10 min。 1.3　局部脑血流量测定 用笔者使用过的方法?[2]进行测定和计算。铂金丝电极从大鼠右侧颅骨打孔后插入。 1.4　脑组织水含量测定 以干湿法?[3]测脑组织水含量。将断头取出的右侧额顶叶脑组织立即放在分析天平上称取湿脑重(wt),然后在100 ℃±2 ℃烤箱中烤至恒重,再称取干脑重。根据公式计算脑水分百分含量值: 1.5　SOD活性及MDA含量测定 按实验程序将大鼠迅速断头取右侧额顶叶脑组织,以4 ℃生理盐水制成10%匀浆液,离心取上清液测定。SOD采用邻苯三酚自氧化法测定,试剂盒由武汉海军抗衰老研究中心提供。MDA采用硫代巴比妥酸(TBA)法测定,试剂盒由北京军事医学科学院提供。具体操作严格按试剂盒说明书进行。 1.6　脑内兴奋性氨基酸含量测定 按实验程序,将大鼠断头处死,迅速取右侧额顶叶脑组织,称重,加4%磺基水杨酸5 ml匀浆,置高速冷冻离心机离心,10 min取上清液上机待测。用日立835-50型氨基酸分析仪测试EAA含量。微型计算机控制自动进样。数据用834数据处理机处理。 1.7　中枢单胺类神经递质的测定 按实验程序,将大鼠断头处死,迅速取出全脑,分离各脑区(皮质部取右额顶叶部分皮质,约相当于半球的前1/3部分,脑干部取全脑干),立即冷冻,然后参照何美霞等方法?[4],用正丁醇、庚烷匀浆分离后提取,日本岛津-MPF-4型荧光分光光度计测定NE、DA和5-HT的含量。 2　结果 2.1　电针对rCBF、脑组织水含量、SOD和MDA含量的影响 造模致大鼠局灶性脑缺血60 min后,在缺血区,局部脑血流量有非常显著下降(P0.05)。见表1、表2。 2.2　电针对局灶性脑缺血大鼠EAA含量的影响 凝闭大脑中动脉致局灶性脑缺血60 min后,在缺血区,Glu和Asp均升高,和假手术对照组相比,差异有非常显著性意义(P0.05)。见表3。 2.3　电针对局灶性脑缺血大鼠中枢单胺类神经递质的影响 局灶性脑缺血大鼠在缺血60 min后,缺血区(皮质部)都出现单胺类神经递质较假手术组的含量降低,以DA、5-HT下降最为明显(P0.05),但给予电针10 min后,则出现不同程度的升高趋势。见表4。 3　讨论 缺血性脑