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维普资讯 ，年一手『占 l34 上海医学检验杂志 1993年第 8鞋第 3期 阶段洗脱法分离血清 B—N一乙酰氢基己糖苷酶同工酶 第二军医大学附属 征医院实验诊断科 (2。0∞3) 逊 王衅 顾军密庆梅 尺甜；．J)≯ 内窖提要 本文探讨了血清 p_N一己酰氪基 己糖苷酶同工酶在DEAE纤维素柱层析中的洗脱特性 ，在研 究丁洗脱图 了阶段洗脱法来分离此同工酶，并对其可靠性作了一些研究。 关键词 NAH isoenzymes 阶段洗脱法 Stepeludon N一乙酰氪基己糖苷酶 (NAIl，EC32．1．30) pH6，0．01mol／LPB洗柱。将透析过夜的 3／-NAH 同 是搐酶体 中的一种术解酶，它广惩存在于体 内各组 土酶样品液 lml上柱 ，并用同样缓冲液 2Ore|洗柱 。 织 中，且以同工酶的形式存在 根据其在等电聚焦 电 再用 内含 O～O．2mol／LNaCI的 50ml缓冲液进行 泳 中的位置不同，可将其分为 3／-NAHB、I、Iz、A．在 线性梯度洗脱 ，流速为 lml／Smin，r』每管收集 Im]， 血清中以A、B为主要组份，I、I。只以很小比例存 分剐测定各管的 NAH活力 。以管号作为横座标． 在。r。近年来的研究表明，0 ”在肝病、胃癌、糖尿病 各管的荧光强度为纵座标作图。 等病人血清中 NAH 活力显著升高 ，但至今对其同 三、结果 工酶的变化仍 丁解甚少 ，为进一步研 究血清中 1． NAH 同工酶的洗脱图谱 ：结果如图 l 血 NAH 同工酶在各疾病中的变化及意义，本实验在原 清 p_NAH 经 DEAE皇于雏素柱层 析后可分成 4部 有 的基础上对 阶段洗脱法分离血清 NAHA…1 分 ，其中 NAHB不披纤维素吸附而直接被洗脱下 I、B的条件进行丁探索 来 p_NAH I在 NaCI浓度为 0．0gniol／L 时邝一 一 、 材料 NAH I2．在NaCI浓度为 0．02～0．05otol／L之间 p_ 1．试剂 ：4一甲基伞形酮 口一N一乙酰氮基葡萄糖 NAHA在 00j～0．ISmo1．，L之 间被}先脱下来 过 苷 (Sigma)，4一甲基伞形酮 (Sigma)，DEAE一纤维索 就为阶段 沸脱 口一NAH 同工酶 fI} ：验愫 (DE一52，Merck)，PE6—2Ooo0(日本)，其条试剂如柠 檬酸、甘氨酸 、NazHPO“KHzPO 、NaCl、NaCO 等 均为国产分析纯试剂 2．仪器：650—60型荧光 分光光度计 (日车 日 立)，小型梯度装置 (上海长江有机制 品服务部)，部 分收集器(上海市长宁科技发展公司)．电子蠕动泵 (上海长江仪器公司)，磁力搅拌器 (上海司乐仪器 厂)。 二 方法 1．3I-NAH活力测l定 ：采用荧光分光光度法 “。 2．样 品处理 ：血清 或酶样 品 lml对 pH6， 0．0]otol／LPB透析过夜 。 i】 口．， --、A 【1iL,lI嘶 计 ：目谱 3．DEAE纤维索柱的制作：(1)取一 5ml注射 2．阶段洗脱 0NAH 同工酶 ：取经透析平衡的 器针筒，下端塞极少量棉花 ，鹱入 DEAE纤维素 2～ 血清 O5ml上 DEAE纤维索柱 (0．6cm×4cm)，使 3cm高即可。(2)取 内径 6ram滴管，下端驶窄处塞极 全部血清流入纤维素内并收集前 0．5ml的流出被 ， 少量棉花 ，装入DEA