超声辅助酶法去抗原处理猪异种骨的试验研究-第三军医大学学报.PDF

超声辅助酶法去抗原处理猪异种骨的实验研究 The experiment of removed porcine bone antigen with ultrasonic-assisted enzyme 田家亮，黄强，周宗科，沈彬，裴福兴 摘要 目的：研究采用超声辅助酶法的方法处理异种骨，期望获得具有理想骨支架特征的骨材料。 方法：将异种猪骨用超临界CO2 脱脂、深低温冷冻处理后，分为三组，实验组用超声波辅 助胰蛋白酶法去抗原处理，对照组单纯采用胰蛋白酶法或超声波法处理异种骨。观察和比较 处理后的骨材料大体标本和切片、抗原性、以及材料的生物力学特性。 结果：超声辅助酶法处理速度最快，去抗原更彻底，孔隙率最高，孔径大小最佳，是一种较 好的骨材料处理方法。 关键词：异种骨；超声辅助酶法；抗原；猪，骨移植 Abstract Objective We removed porcine bone antigen with ultrasonic-assisted enzyme and anticipate acquired a ideal bone scaffold material. Methods After porcine bone defatted with Supercritical CO2 Fluid and deep frozen, the materials was divided into three groups. The experiment group remove antigen with ultrasonic-assisted enzyme, and the other groups processed only with ultrasonic or enzyme. The antigen was observed by immunohistochemistry. Microstructure and biomechanical properties of different groups were observed by Electronic Scanning and INSTRON 8874. Results: The methods of ultrasonic-assisted enzyme is faster and completely to remove antigen. The material had a highest porosity and best bore diameter. Key words: xenobone; ultrasonic-assisted enzyme; antigen; porcine ；bone transplantation 在异种骨中的除抗原处理中，酶法脱蛋白处理已经成为近来研究的热点，胰 蛋白酶是一种非特异性消化酶，可以消化异种骨表面的包括MHC- Ⅰ、MHC- Ⅱ抗 原在内的异种骨抗原。相对于强氧化剂，酶的水解过程温和，不会对骨中无机成 [1] 分的结构造成破坏 。传统的胰蛋白酶水解蛋白需要12 小时或更长的作用时间， 近年来研究发现，超声波能在一定条件下可以增加胰蛋白酶的活性，增加其水解 [2-3] 蛋白的速度 。可以将胰蛋白酶水解蛋白的作用时间缩短至数分钟，而且其分 解较为完全。本研究采用超声波辅助胰蛋白酶的方法对猪异种骨行去抗原处理， 研究经过本法对异种骨的影响。 1.材料和方法 1.1 实验设备 超 声 波 细 胞 破 碎 仪 （美 国 ）、 超 临 界 CO2 流 体 设 备 （德阳）、JSM-5900 型扫描电子显微镜 （日本）、INSTRON8874 生物力学测试系 统 （美国）各1 台 1.2 实验动物 近交系内江猪一头，雄性，8 月龄，购于四川大学华西基础医学动物实验中 心。无菌条件下取股骨干骺端带皮质松质骨，制成0.5 ×0.5 ×0.5 cm3 大小颗粒骨， 去除周围软组织及骨膜。 1.3 实验方法 根据骨材料处理方法的不同，随机分成ABCD 四组。 （1）A 组：超临界脱脂＋深低温冷冻＋超声辅助酶法：① 蒸馏水反复冲洗 骨及髓腔内物质；② 用超临界CO （16~18 kg ／h 的CO 流动率，压力为25 MPa，