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实验十一 叶绿素总含量测定
实验十一 叶绿素含量的测定
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一.实验原理
叶绿素a、b在长波的最大吸收峰分别在663nm、645nm,据Lamber-Beer 定律,可得浓度C与光密度D间的关系式:
D663=82.04Ca +9.27Cb
D645=16.75Ca +45.6Cb (浓度单位:g/mL)
CA= 12.72D663 – 2.59D645
CB= 22.88D645 – 4.68 D663
CT = 20.29D645 +8.02D663 (浓度单位:mg/L)
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二. 试剂与材料
一、试剂
无水乙醇;95%乙醇;
50 mmol/L磷酸缓冲溶液(pH 6.8)。
二、材料
新鲜植物叶片
三、器材
研钵、分光光度计。
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取5g新鲜植物叶片,以10 mL 磷酸缓冲溶液(50 mmol/L, pH 6.8)将其研磨成均质。吸取1ml上清液,注入50ml离心管中,再加入4ml无水乙醇,置于4℃黑暗下30分钟。然后于4℃下以1000 g离心15分钟,以分光光度计分别测定665 nm、649 nm波长处吸光值,以95%乙醇做空白。
三. 实验步骤
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四. 结果计算
4.1 结果计算
叶绿素浓度=6.10×A665nm+20.04×A649nm
(mg/L)
叶绿素含量是以每克鮮重含有叶绿素的毫克数
(mg/g)表示。
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五. 注意事项
注意叶绿素一定要提干净,避免造成测定误差
叶绿素初提液体积不要太多,以免浪费试剂,如果浓度太高可进行适当稀释
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