家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶基因克隆及其在模拟失重环境中的.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, December 25; 24(12): 2041-2048 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶基因克隆及其在模拟失重环境 中的表达模式分析 1 2 1 1 1 2 2 1 2 1 田宗成 , 周博 , 骞爱荣 , 续惠云 , 狄升蒙 , 赵云坡 , 章玉萍 , 刘佳 , 黄勇平 , 商澎 1 西北工业大学生命科学院 空间生物实验模拟技术国防重点学科实验室 特殊环境生物物理学研究所, 西安 710072 2 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 上海 200032 摘 要: 采用RT-PCR 和RACE 技术克隆了家蚕3-羟基异丁酸脱氢酶(hibadh)基因全长cDNA(GenBank 登录号EU719652) 并对其序列进行了分析, 用RT-PCR 方法检测了hibadh 基因在家蚕5 龄幼虫不同组织中的分布, 最后用real-time RT-PCR 方法分析了整个胚胎期家蚕hibadh 基因在模拟失重环境中的表达模式。克隆的hibadh 基因cDNA 全长 1074 bp, 包含1 个能编码完整Hibadh 长度为969 bp 的开放阅读框。家蚕hibadh 基因与伯霍尔德杆菌、果蝇、蜜蜂、热带爪蟾、小鼠、 人类等 6 个物种hibadh 基因推导的氨基酸序列同源性分别达到46% 、43% 、48% 、44% 、45% 、45% 。Hibadh 蛋白为分 泌蛋白, 不存在糖基磷脂酰肌醇锚定位点, 分子量和等电点分别为34.1 kD 和9.14 。hibadh 基因在家蚕 5 龄幼虫的头、 丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪体、马氏管等组织中稳定表达。模拟失重环境中家蚕hibadh 基因在胚胎发育的不同时 期表达量不同, 胚体突起发生期和反转期 hibadh 基因表达量分别上调 2.3 倍(P0.05)和 4.6 倍(P0.01), 气管形成期 hibadh 基因表达量下调 7.6 倍(P0.01), 其余时间段hibadh 基因表达量没有明显变化。整个胚胎发育期内, 模拟失重组 与对照组相比较hibadh 基因总表达量下调2.6 倍(P0.05) 。在模拟失重环境中, 家蚕hibadh 基因的表达模式与家蚕整体 的响应模式有相似之处但不尽相同。基因对环境反应的灵敏度高于有机体整体对环境反应的灵敏度。该研究有利于进 一步探讨hibadh 基因的重力生物学机制。 关键词: 家蚕, 3-羟基异丁酸脱氢酶, RACE (Rapid amplification of cDNA ends), 失重 Cloning of Silkworm 3-Hydroxyisobutyrate Dehydrogenase Gene and Its Expression Patterns Analysis in Simulated Weightless Environment 1 2