小鼠不同胎龄全胚切片标本的制作与观察.pdfVIP

78 堡型堂堑窒2Q盟生筮堑鲞筮!塑垒堂№：2熊：型堑：№：! ·技术与方法· 小鼠不同胎龄全胚切片标本的制作与观察 刘小蓉安靓李进 (第一军医大学组胚教研室，广州510515) 用小自鼠胚胎制成标本，作为教学或科研的实验材 4结果与讨论 料，具有很多有利条件。小白鼠出生后2～3个月即达成 熟；妊娠时间较短，仅19～21d；每胎产仔一般为8～10 Bouin固定液常用于形态观察的标本的制作，可得到 只，属于高产实验动物，故在短期内可获得较多的实验标 较理想的小鼠不同时期全胚标本。同时也可根据实验目 本。许多实验室用妊娠小白鼠作为实验材料，进行发育 的的不同选择不同的固定液进行固定，用于各种免疫组 生物学、胚胎致畸学及各种药物筛选等研究L1“J。 织化学及分子杂交的实验bJ。 一般小鼠孕期仅为20d左右，每胎产仔6—15只。 l实验动物的选择 在本实验组观察过程中，最少产仔为一只、最多为11只， 一级达标的昆明小鼠，由第一军医大学实验动物中 其中出现过死胎，原因不明，有待于进～步研究。 取材及固定注意：5～9胎龄的胚胎不易剥离，因此连 心提供。小白鼠的选择以健康、交配率高为基本条件，故 同子宫一起固定。10一12胎龄的胚胎先同子宫一起固定 实验动物选用的为成年小白鼠，体重26～34 g，鼠毛洁白 15～20min后可剪开子宫剥离蜕膜，取出全胚胎再进行固 光滑，紧贴皮肤，腹部丰满，行动活跃。而鼠毛竖立，无光 定。16～加胎龄的胚胎可直接剪开子宫剥离蜕膜取出全 泽，腹部毛稀且显黄色，整个腹部扁平，呈消瘦状态，行动 胚胎进行固定，同时再腹部剪开一个小口或可用5Inl注 迟缓的小鼠不宜采用。 射器抽取适量固定液从腹部注射到体内，以保证全胚胎 h，10—20 2小白鼠动情期的观察及胎龄的确定 得到充分固定。5—9胎龄的胚胎固定时间为12 胎龄的胚胎固定时间为1～2d，有利于保证全胚胎结构的 动情期：外阴部暗红色，充血，肿胀，阴道口开放，阴 完整性。脱水从低浓度酒精开始，一般从30％乙醇或 道黏膜干燥。阴道涂片可见大量无核角化上皮细胞。 50％乙醇开始。由于胚胎组织极为柔软，含水量大，脱水 雄性与雌性小鼠以1：2或1：l同笼，每日下午4～6 酒精浓度高极易引起组织的收缩。低酒精浓度脱水时间 时交配，次晨8时检查阴栓或精子涂片，确定是否怀孕。 可相对延长，高浓度酒精脱水时间可相对缩短。本室采 阴栓观察法：出现阴栓即可认