什么是单抗,如何生产.docxVIP

1、抗体和抗原的介绍抗体：指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。图：抗体的示意图抗原：是指机体不能识别的异源物，如病毒、细菌等等。当异源物（抗原）入侵机体的时候，抗原物最先会被巨噬细胞吞噬，我们的免疫系统就会发生如下图的反应，最终B淋巴细胞在抗原刺激下活化成浆细胞之后，分泌的一类能与相应抗原发生特异性结合，并消除抗原的免疫球蛋白（抗体）。主要分布在体液中，已知有IgG、IgA、IgM、IgD 和IgE 等5 类免疫球蛋白，主要分布在血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。图：抗体产生的机制2、单抗单克隆抗体定义：只识别一种表位(抗原决定簇)的抗体，来自单个Ｂ淋巴细胞的克隆或一个杂交瘤细胞的克隆。单抗产生基本原理：由于每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因，只能被一种抗原决定簇激活产生一种抗体，即为单克隆抗体，又称为单抗。但是B细胞生长缓慢得到的单抗数目有限。后来科学家研究发现把能够产生单抗的Ｂ淋巴细胞与能够无限增殖的多发性骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞。这种细胞兼有两个亲代细胞的特征，既有骨髓瘤细胞无限生长的能力，又有Ｂ淋巴细胞产生单克隆抗体的功能，为实现单抗的大规模奠定了基础。3、单抗的制备单抗的制备流程：制备抗原-----抗原注射小鼠-----取小鼠脾脏制成细胞悬液----脾细胞（即B细胞）体外和骨髓瘤细胞融合----筛选阳性克隆（杂交瘤细胞）----接种阳性克隆继续细胞培养，具有两种方式：（1）体外大规模细胞培养获取单抗。（2）转移到小鼠体内培养，从腹水中提取单抗----单抗纯化制备。需要注意的是用常规技术生产的抗体是完全鼠源抗体。图：单抗的制备流程4、单抗的分类由于正常的手段制备的单抗是完全鼠源的抗体，进入人体，易被人的免疫系统当作异源物，发生人抗鼠反应（即HAMA反应）。HAMA反应对鼠源的单抗分子有着较强的破坏作用，严重影响了鼠源单抗在人体内的功效。因此20世纪80年代，研究者们开始使用基因工程手段改造鼠源单抗，努力制造人源化的单抗，以及努力实现生产完全人化的抗体，减少人抗鼠反应，按照单抗人源成分的组成可以简单非为四类：鼠源单抗、嵌合单抗、人源化单抗、全人源单抗。鼠源单抗：就是指鼠分泌的抗体，其所有序列都是鼠的，注射人体易产生人抗鼠反应（即HAMA反应）。最初的上市的单抗药物大多是鼠源性的，鉴于副反应较大，目前已经很少使用。但是由于鼠源单抗代谢快，适用于像利卡汀这样偶联放射性性物质的药物。嵌合单抗：就是利用DNA重组技术把鼠单抗的轻链、重链可变区基因插入含有人抗体的恒定区域的表达载体中，并转入合适的宿主表达出来的抗体。这样抗体即具有识别抗原的特异性，又减少了抗体的人抗鼠反应。人源化单抗：就是通过测定鼠源抗体的序列，截取其决定簇互补区的序列移植到人抗体的编码框中表达，并经过一定的亲和力测试和筛选，最终选出仍然具有特异性识别能力的单抗。可以最大限度的减少抗体的人抗鼠反应，而且特异性、亲和力不变，应用性较强，已经成为主流技术。但是实现人源化具有一定的技术难度，是国内企业努力克服的技术难点。全人源单抗：目前主要是通过转基因小鼠以及噬菌体展示文库制备的抗体，其重链和轻链都是来源于人，因此副作用更小，免疫亲和力基本保持不变，是未来的主流技术。目前已经获批生产的有7个，其中雅培的阿达木单抗（humira）是剑桥抗体技术中心的噬菌体展示技术制备而来，EvaluatePharma曾预测到2016年，Humira的销售额将超越罗氏公司的抗癌药物Avastin，成为世界上最赚钱的药物。图：抗体产品不断升级、副作用更小效果更好资料来源：长江证券研究所现代技术的进步有望助推单抗的快速发展：从多抗---单抗—基因工程抗体—完全人源抗体，每一次技术的进步都为单抗的发展注入新的活力。未来单抗有望借助于基因工程技术的发展，提高单抗的药效，扩大单抗的使用范围：（1）使抗体小分子化，如研究纳米抗体，更容易达到实体瘤深部的肿瘤细胞，提高药物的疗效.（2）在抗体上偶联更为高效的放疗药物、抗肿瘤抗生素等，使少量达到肿瘤细胞的抗体能够起到较强的治疗效果，可大幅减少抗体的使用量，减少单抗药物成本，降低抗体药物的价格。（3）因为目前全球的单抗研发热点主要集中在VEGF、EGFR，HER2以及CD20等靶分子上，后基因组时代，转录组学的研究有望寻找到更多的疾病特异性表达的靶分子，能够治疗更多的疾病，扩大单抗的应用领域，将单抗药物市场推向一片未知的蓝海。单抗药物研发、生产抗体生产的主要过程中，有多项技术难点导致单抗进入技术壁垒较高，其中如何实现抗体人源化以及大规划的细胞培养、下游抗体的纯化均是单抗生产的难点。图:抗体药物的研发、生产过程数据来源：华创证券研究所、红色框