分子生物学重点修改~.docVIP

克隆：是指同一副本或拷贝的集合，获取大量单一拷贝的过程称为克隆化，也称无性繁殖。 DNA克隆：应用酶学的方法，在体外将各种不同来源的DNA与载体DNA连接成具有自我复制能力的DNA分子，进而通过转化、转染或感染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子，再进行扩增、提取获得大量同一的DNA分子，即DNA克隆，又称为基因克隆。 基因组文库：是指包含某一生物体全部基因组DNA序列的克隆群体，其储存着一个细胞或者生物体全部基因组ＤＮＡ的编码区和非编码区的DNA片段，含有基因组的全部遗传信息。 cDNA文库：是指某一组织在一定条件下所表达的全部mRNA经逆转录而合成的全部cDNA的克隆群体，它将细胞的基因表达信息以cDNA的形式储存于受菌体中。 PCR技术：又称体外DNA扩增技术，能快速，特异地在体外扩增需要的DNA片段。实际上是DNA体外合成放大技术，可看作生物体外的特殊DNA复制。DNA定点同源重组，改变基因组中的某一特定基因，从而在生物活体内研究此基因的功能。 转基因动物：以实验方法将外源基因导入动物染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。 转基因植物：是指利用重组DNA技术将克隆的优良目的基因导入植物细胞或组织中进行表达，从而获得新性状的植物。 核酸杂交：利用变性作用将DNA双链分开，加入不同来源地DNA单链或RNA链经过退火处理，不同来源地两条多核苷酸链靠碱基互补关系形成杂种双螺旋的过程。 Tm：将增色反应达一半即双螺旋被解开一半时的温度称为变性温度或解链温度即Tm。 核酸探针：是指能与特定核苷酸序列发生特异互补杂交，杂交后又能被特殊方法检验的已知被标记的核苷酸链。 固相分子杂交：待测靶核苷酸预先固定在固体支持物上，标记的探针则游离在溶液中进行杂交，最后使杂交分子留在固体支持物上。 液相分子杂交：将参加液相杂交的两条核酸链都游离在溶液中，在一定条件下进行杂交，然后再将未杂交的探针除去，即得到杂交后的核酸分子。 增色效应：当核酸溶液缓慢加热至双螺旋开始解链之前，在260nm的吸收值基本不变，若继续加热至某一温度时，其吸收值急剧上升，直至双链完全解离成随机卷曲为止，这种紫外吸收值随变性程度急剧升高的现象称高色效应或增色效应。 预杂交：为了减少非互补核酸的非特异性杂交反应，即清除本底，在杂交反应前进行预杂交，将滤膜上非特异性的DNA结合位点封闭。 聚合酶链式反应：又称体外DNA扩展技术。能快速。特异地体外扩增所需要的DNA片段，将pg水平的DNA特异地扩增100万倍左右，达到ug水平。 引物：是两条人工合成的，能与模板DNA互补结合的脱氧寡核苷酸。 逆转录PCR：以RNA分子为模板进行扩增，首先要进行反转录产生cDNA，然后进行常规的PCR反应。 定量PCR：是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 实时PCR：又称荧光定量PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光化学物质，随着PCR反应的进行，PCR反应产物的不断累积，荧光信号强度也等比例增加，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 反向PCR：通常PCR扩增是沿着已知序列方向进行的，若扩增是对已知序列两侧的未知序列进行的，则称为反向PCR。 基因诊断：利用分子生物学技术，检测基因结构及其表达是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 基因治疗：通过一定方式将人正常或野生型基因或有治疗作用的DNA片段导入人体靶细胞，从而达到治疗遗传病、癌症和其他疾病的目的。 基因失活：将特定的核酸序列导入宿主病变细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，以达到治疗疾病的目的。 基因增补：指将目的基因导入病变细胞或其他细胞，其表达产物补偿缺陷基因的功能。 RFLP：若突变（多为中性突变）导致某一限制性核酸内切酶识别位点改变，经酶切后，出现DNA片段长度的差异，在人群中形成两种或两种以上的限制性类型，并按孟德尔规律遗传，称为限制性片段长度多态性。 如何获得目的基因？ 根据研究目的和基因来源的不同，可选用不同的方法获取目的基因。1.化学合成法：已知目的基因的核苷酸序列，或根据基因产物的氨基酸序列推导出核苷酸序列，则可利用全自动DNA合成仪化学合成该目的基因。 特点：快速、有效、不需收集基因组织来源，特别对于获取小片段目的基因。 2.PCR或RT-PCR法：已知目的基因的全序列或目的基因片段两侧的DNA序列，采用PCR或RT-PCR方法从组织或细胞中获取目的基因。特点：简便、快速、特异，最常用。 3.从基因文库中筛选 ①基因组DNA文库指包含某一生物体全部基因组DNA序列的克隆群体，其储存着一个细胞或生物体的全部基因组DNA的编码区和非编码区的DNA片段，含有基因组的全部遗传信息。②cDNA文