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卵母细胞凋亡的分子机制 摘要 细胞凋亡是机体生长发育、细胞分化和病理状态中细胞自主性死亡的过程。由于细胞凋亡在正常胚胎和器官的发育、免疫反应，机体细胞数量的恒定与调控，无功能或异常细胞的清除，以及在多种遗传性与获得性疾病具有举足轻重的作用，故近几年细胞凋亡的研究已成为生命科学研究领域中的热点。卵母细胞是目前研究试管和转基因动物等的主要和最基本的材料，本文主要从分子机制对卵母细胞凋亡进行解读，旨在为临床研究提供更多科学的参考资料。 关键词 卵母细胞 细胞凋亡 分子机制 从20世纪80年代末期以来，人们对细胞凋亡的认识逐渐深入，对细胞凋亡发生机理的了解越来越透彻，同时也发现这一过程包含着非常复杂的调控机制。尽管仍有许多问题甚至是关键的问题没有搞清楚，但近几年的研究在凋亡信号转导途径、细胞凋亡的生化反应机制以及细胞凋亡的基因调控等方面都取得了显著的进展。 细胞凋亡的生物学特征 从形态学观察，细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞， 即便是一小部分细胞也是非同步发生的。首先出现的是细胞体积缩小，胞间连接消失，与周围的细胞脱离，核质浓缩，核膜核仁破碎；胞膜有小泡状形成，胞膜结构仍然完整，最终可将凋亡细胞分割为几个凋亡小体[1]。 其次，细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解, 这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律, 所产生的不同长度的DNA片段约为180~200 bp的整倍数,而这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度, 提示染色体DNA恰好是在核小体与核小体的连接部位被切断, 产生不同长度的寡聚核小体片段。实验证明, 这种DNA的有控降解是一种内源性核酸内切酶作用的结果, 该酶在核小体连接部位切断染色体DNA,这种降解表现在琼脂糖凝胶电泳中就呈现特异的梯状Ladder图谱, 而坏死细胞呈弥漫的连续图谱[2]。 最后，细胞凋亡的生化改变不仅仅是DNA的有控降解, 在细胞凋亡的过程中往往还有新的基因的表达和某些生物大分子的合成作为调控因子[3]。如在糖皮质激素诱导鼠胸腺细胞凋亡过程中, 加入RNA合成抑制剂或蛋白质合成抑制剂即能抑制细胞凋亡的发生。 二、卵泡、卵母细胞凋亡的特征 卵泡闭锁在形态上出现一系列变化：卵母细胞染色体密集，核出现严重偏位、固缩；透明带膨胀、塌陷；颗粒细胞松散、萎缩并脱落进入卵泡腔内；卵泡液被吸收，卵泡壁塌陷，卵泡膜内层细胞增大，成多角形，并被结缔组织分隔成团索状，分散在卵巢基质中，形成能分泌雌激素的间质腺．在卵泡闭锁过程中，原始卵泡退化的数量最多，但凋亡小体(apoptotic body)被邻近巨噬细胞迅速吞噬，故这一过程并不明显。目前认为，原始卵泡、初级卵泡闭锁主要是由卵母细胞凋亡引起．在卵泡发育后期，有腔卵泡及排卵前成熟卵泡的闭锁，可以是卵母细胞自身凋亡引起 也可能是由卵泡中颗粒细胞凋亡引起[4]。实验表明，闭锁卵泡中有凋亡细胞所特有的DNA梯带，正常卵泡则没有，表明在闭锁卵泡中有细胞凋亡发生[5]。 在卵母细胞成熟的各阶段，尤其在多胎动物，有大量的卵泡发生生理性闭锁，颗粒细胞和卵母细胞发生凋亡．卵母细胞凋亡的特征表现有：细胞表面微绒毛消失；胞质凝集，核发生固缩成大团块，核碎裂成几部分；细胞碎裂成几个由质膜包围部分细胞器与核碎片结构，共同构成了凋亡小体，透明带破裂后，被侵入的吞噬细胞吞噬。 从形态学上讲，细胞凋亡贯穿于胎儿和成年期的卵泡当中，在次级和窦状卵泡中的颗粒细胞中可以检测到。这个过程当中的机制可以假设包含以下几个方面：（1）“质量控制”以剔除减数分裂异常现象。（2）缺乏存活因子。（3）自我牺牲的过程。 三、细胞凋亡的一般机制 细胞凋亡一般存在着两种机制[1]：一种是通过和在细胞表面受体与死亡因子结合而引起的细胞凋亡，另外一种是线粒体介导的细胞凋亡。 死亡受体介导的细胞凋亡是通过将死亡受体（如Fas，TNFR，IFN和TRAIL受体）结合到配体上产生的，这种结合启动了受体的结扎和凋亡信号通过死亡区域：死亡效应结合域和半胱天冬酶补充的区域的传递。死亡区域主要存在于细胞中蛋白中，例如：FADD，TRADD，RIP以及一些跨膜蛋白（TNF-R1，TRAIL-R1/DR4和TRAIL-R2/DR5）中。 线粒体介导的凋亡主要是启动Bcl-2蛋白是细胞色素c从线粒体中释放出来，细胞色素c与Apaf-1结合到半胱天冬酶9，之后引起级联反应，导致细胞死亡。 上面图表简单详细的说明了两种细胞凋亡的机制。 四、卵泡发育动力学 我们对卵子发生、卵泡发生、卵母细胞的丢失、卵泡选择和闭锁仍是不完全的。在人类，卵巢中卵泡的储量在胎儿时期已经建立起来了，之后在卵泡发生的过程中不断的丢失，在出生前，三分之二的卵母细胞通过细胞凋亡的形式失去了。因此，细胞凋亡是卵巢功能和发育中必不可少的成分。另外，在胎儿时期，