改后超声波提取山绿茶中的黄酮.docVIP

超声波提取山绿茶中的黄酮 摘 要：目的 用超声波提取技术提取山绿茶中的主要有效成份黄酮。方法 以山绿茶为原料，乙醇浓度为95％、提取温度为45℃、提取时间为30 min提取、用大孔树脂的吸附进行进一步分离提纯。 结论 此工艺简单可行，且超声波对总黄酮成分无影响，适用于工业化生产，及黄酮药用性高。 关键词：山绿茶 黄酮 超声波提取 1 前言 山绿茶为冬青科植物海南冬青的叶片，该植物主要含有黄酮、三萜苷类、三萜酸类、皂素及香豆素类等化学成分，还含有一定的微量元素，具有清热消毒、活血通脉、抗氧化等多方面生物活性，有增加免疫功能，促进人体发育，延缓衰老等多种功效。 目前，山茶主要用于降血压、降血脂、降胆固醇以及冠心病、脑血管疾病等病症。临床上有用于生产降压片，降压的药学效果比较显著。还用于袋泡剂的研制。黄酮类化合物是山绿茶植物中的主要有效成份，具有较强的生理活性。其中的类黄酮能增强维他命C的抗氧化功效，这种类黄酮也是珍贵营养品，所以它对维持皮肤美白，可谓是有珍品级的效果。黄酮的功效是多方面的，它是一种很强的抗氧剂，这种抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生。CO2超临界流体萃取法等．普通的有机溶剂提取法通常比较耗时，有时还须使用有毒有害溶剂，污染产品．微波萃取法通常可以加速提取过程，但提取过程往往温度较高，可能对有效成分造成破坏；另外，微波的泄漏也会对操作者带来危害．酶辅助提取法可以加速提取过程，提高提取效率，但提取过程各种条件控制不当容易导致酶的失活．CO2超临界流体萃取法可以提高提取效率，但提取压力较高，需要特殊装置，并且有些提取过程也并不省时．超声波提取法常常由于设备容易得到、操作简单、提取过程温和、省时、提取效率高而得到广泛应用。 可以通过建立大鼠前列腺增生模型, 观察并分析从山绿茶中提取获得的总黄酮对大鼠BPH模型前列腺细胞凋亡及腺体组织细胞超微结构的影响, 以此研究山绿茶总黄酮抑制前列腺增生的作用机制, 为开发山绿茶的新用途提供理论依据。 2实验原理 超声提取法是利用超声波增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，提高药物溶出速度和溶出次数，缩短提取时间的浸提方法。 取10g山绿茶叶（干）浸泡30min 超声波提取30min 45℃ 布氏漏斗抽滤 提取液 茶叶残渣 布氏漏斗抽滤 蒸馏水冲洗3次 旋转蒸发仪蒸干水分（粗产物） 大孔树脂提纯 干燥得精产物（测量、鉴定） 3 实验药品与器材 3.1 药品：山绿茶、95％的乙醇、盐酸-镁粉、1％的氯化铝、浓硫酸、1％的醋酸镁、AB-8大孔吸附树脂；5％亚硝酸钠水溶液、2%盐酸、5%盐酸、2％氢氧化钠、5％氢氧化钠、10％硝酸铝、10%的NaCl 3.2 器材：超声波仪、电热鼓风干燥箱、旋转蒸发仪，布氏漏斗,恒流泵，15mm*350mm、紫外分光光度计、层析柱、移液管 4.1黄酮的提取 4.2大孔树脂的吸附滤液通过已装好的大孔吸附树脂玻璃柱，对粗提液进一步分离提纯。 4.2.1树脂的预处理 预处理的目的：为了保证制剂最后用药安全。树脂中含有残留的未聚合单体，致孔剂，分散剂和防腐剂对人体有害。 预处理的方法：乙醇浸泡24h→用乙醇洗至流出液与水1：5不浑浊→用水洗至无醇味→5%HCl通过树脂柱，浸泡2-4h→水洗至中性→2%NaOH通过树脂柱，浸泡2-4h→水洗至中性，备用。最后在层析柱顶端塞入一小团脱脂棉，防止在加入试剂时直接冲击树脂，破坏床层。所装树脂床层为30ml 4.2.2上样 将山绿茶粗提物溶于少量水中，以一定的流速加到柱的上端进行吸附。上样液以澄清为好，上样前要配合一定的处理工作，如上样液的预先沉淀、滤过处理，pH调节为5左右，使部分杂质在处理过程中除去，以免堵塞树脂床或在洗脱中混入成品。 4.2.3洗脱 先用水清洗以除去树脂表面或内部还残留的许多非极性或水溶性大的强极性杂（多糖或无机盐），然后用95%的乙醇洗脱，回收洗脱液。 4.2.4再生 再生的方法：95%乙醇洗脱至无色，再用2%盐酸浸泡，用水洗至中性，再用2%NaOH浸泡，再用水洗至中性。 注意：再生后树脂可反复进行使用，若停止不用时间过长，可用大于10%的NaCl溶液浸泡，以免细菌在树脂中繁殖。一般纯化某一品种的树脂，当其吸附量下降30%以上不宜再使用。 上柱液流速不宜过快，一般保持在每小时通过2至3个柱体积，（蒸馏水洗涤后再用95％乙醇洗脱树脂，洗脱速比吸附速度慢，一般为每小时1至2个柱体积。 4.2.5回收产品： 洗脱液转入到旋转蒸发瓶，真空旋转蒸发至干燥，转移至干燥箱内充分干燥，得到提取物总黄酮干粉M?。 4.3黄