胆脂瘤囊内碎屑组织对HaCaT细胞p38MAPK信号通路表达影响及意义.pdf

胆脂瘤囊内碎屑组织对HaCaT细胞P38MAPK信号通路表达的影响及意义 中文摘要 信号传导通路表达的影响及意义 专 业：耳鼻咽喉科学 申请人：唐浩程 指导老师：张官萍主任医师 中文摘要 中耳胆脂瘤，是耳科常见多发疾病，典型的中耳胆脂瘤由三部分组成，囊袋 基质结构、囊内容物及囊带基质周围组织，是一种非真性肿瘤。具有肿瘤的某些 生物学特性，如独立持续的增殖性、侵袭破坏性、复发性等局部膨胀性生长特征， 但不具经淋巴、血液的远灶转移性。病变持续膨胀性生长，加之酶类腐蚀破坏作 用，邻近骨质吸收破坏可导致颅内外一系列并发症，如颞骨内并发症如迷路炎、 岩锥炎及耳源性周围性面瘫；颅外并发症如颈深部脓肿、经血源性感染途径的肺 脓肿等；颅内并发症如脑脓肿、脑膜炎、耳源性脑水肿等，严重者脑疝形成危及 生命。手术是目前治疗中耳胆脂瘤唯一有效方法。 activatedkinase p38丝裂原活化蛋白激酶(p38mitogenprotein activated p38MAPK)信号传导通路是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen protein kinaseMAPKs)信号传导系统的重要组成部分，在细胞增殖、分化、炎症、应激 过程中发挥重要的作用。p38MAPK是p38MAPK信号转导通路的关键酶，可在多种 TNF— necrosisfactor—Q 条件下激活，如炎性细胞因子：肿瘤坏死因子一Q(tumor n)、白细胞介素一l(interleukin-1IL-1)、自介素一6(interleukin一6IL一6)、细 菌坏死崩解产物、紫外线照射、应激条件、细胞外高渗状态等。 中耳胆脂瘤内存在细菌感染，周围肉芽组织存在多种炎症免疫细胞，分泌表 达多种炎性细胞因子，胆脂瘤囊袋基质上皮组织内亦存在多种细胞因子表达，胆 脂瘤囊内容存在鳞屑组织、LPS等内容物。上述条件可能成为激活胆脂瘤上皮中 p38MAPK信号转导通路的重要因素。但目前有关p38MAPK信号传导通路在中耳胆 胆脂瘸囊内碎屑组织对HaCaT细胞P38MAPK信r弓．通路表达的影响及意义 中义摘要 脂瘤病理机制中的作用的研究较少，本课题通过生物体外试验，用胆脂瘤囊内容 物萃取液干预HaCaY细胞，观察HaCaT细胞受干预后的增殖情况，并检测期间 机制中的作用和意义。 研究目的：用胆脂瘤囊内碎屑组织萃取液干预HaCaT细胞，以模拟简易胆 脂瘤上皮细胞生长微环境，建立体外胆脂瘤上皮细胞增殖模型，检测是否存在 p38MAPK的激活与表达，探讨p38MAPK信号通路在中耳胆脂瘤病理机制中的作用。 研究方法： HaCaT细胞株培养传代：HaCaT细胞(人永生化表皮细胞，购置于中国科学 院广州分院)，传代培养。 胆脂瘤囊内碎屑组织萃取液的制备：术中收集胆脂瘤囊内容物组织，急送一 80。C冷存。试验时取出后，放置于匀浆器中，加少许液氮，快速研磨成粉状，溶 bufferedsolution 于无菌磷酸盐缓冲溶液(phosphate PBS)中，低温12000转 ／min离心20min，留取上清，滤过除菌。进行Bradford法蛋白定量。 试验一：胆脂瘤囊内碎屑组织萃取液对HaCaT细胞增殖影响：对照组无菌 PBS干预HaCaT细胞，实验组l、2、3组分别按胆脂瘤囊内碎屑组织萃取原液、 检测各组细胞数及活性。 干预HaCaT细胞，实验组胆脂瘤囊内碎屑组织萃取原液干预tlaCaT细胞，用免疫 在HaCaT细胞的表达。 干预HaCaT细胞，实验组l和实验组2分别为：按胆脂瘤囊内碎屑组织萃取原液、 聚合酶链式反应(rev