缺氧对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 缺氧对新生大鼠海马神经干细胞增殖分化的影响 目 的 探讨单纯性缺氧对新生大鼠海马组织神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。 材料和方法 将36只新生ld 组)、Q5组(缺氧5h组)，每组12只。 1、原代培养 新生1天Wistar大鼠脑海马组织细胞在含有碱性成纤维生长因子(bFGF)、 表皮生长因子(EGF)和B27的无血清培养液中进行原代培养。 2、单克隆培养 当原代培养克隆球直径约为200／tm时，利用有限稀释法进行单细胞克隆培养。 3、传代培养 单细胞克隆培养形成的克隆球直径约200／llm时进行传代培养。 4、神经干细胞鉴定 当第3代细胞大多数克隆球直径约为200／zm时，部分克隆球进行巢蛋白 (Nestin)和烟酸己可碱33342(Hoechst33342)免疫荧光染色。 (2)诱导分化及染色 当第3代细胞大多数克隆球直径约为200／zm时，部分克隆球在含10％胎牛血 清的DMEM／F12培养基中诱导分化3d。诱导分化3d的细胞分别行神经元特异性 免疫荧光染色。 5、统计分析 记录各组神经干细胞克隆球生长至直径达到200／zm时所需时间；计数每100 个有核细胞中NSE阳性的神经元的个数，计算每组神经干细胞向神经元分化的比 率，进行统计学分析。 实验结果 1、神经干细胞的鉴定结果 单细胞克隆培养形成的克隆球表达Nestin，诱导分化3d后细胞表达NSE、 GFAP。 2、缺氧对神经干细胞增殖影响的结果 la Q2组、N组、Q5组细胞原代培养克隆球直径达为200m所需时间分别为： 7d、、10d、13d。 3、缺氧对神经干细胞分化影响的结果 Q2组、N组、Q5组神经干细胞分化为神经元的比例分别为22．57±4．08％、 16．14+6．2096、10．864-2．54％。各组之间均存在显著差异，p0．05。 结论 短时间缺氧可促进在体神经干细胞增殖及神经干细胞向神经元分化；长时间 缺氧则抑制在体神经干细胞增殖及神经干细胞向神经元分化。 关键词 缺氧； 新生大鼠；海马；神经干细胞；增殖；分化 2 ·英文论著摘要· Influenceof onProliferationand Hypoxia of DifferentiationNeuralStemCellsfrom ofNeonate Rats Hippocampus ective Obj To theinfluenceof onthe anddifferentiat— study Hypoxiaproliferation ionofneuralstem inneonaterats． hippocampus cells(NSCs)of Methods 36ratsweredividedinto N to