分离化学-04.pptVIP

一、HPCE基本原理 basic principles of HPCE 二、电渗现象与电渗流 electroosmosis and electroosmotic flow 三、影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis 四、淌度 mobility 五、PHCE中的参数与关系式 parameters and relation in HPCE 六、影响分离效率的因素 factors influenced separation efficiency 1.纵向扩散的影响 在HPCE中，纵向扩散引起的峰展宽：σ2=2Dt 由扩散系数和迁移时间决定。大分子的扩散系数小，可获得更高的分离效率，大分子生物试样分离的依据。 2.进样的影响 当进样塞长度太大时，引起的峰展宽大于纵向扩散。分离效率明显下降；理想情况下，进样塞长度： Winj= (24D t )1/2 实际操作时进样塞长度小于或等于毛细管总长度的1%～2%。 3.焦耳热与温度梯度的影响 电泳过程产生的焦耳热可由下式计算： ?m—电解质溶液的摩尔电导；I—工作电流：cm—电解质浓度； 散热过程中，在毛细管内形成温度梯度（中心温度高），破坏了塞流，导致区带展宽。 改善方法： （1）减小毛细管内径； （2）控制散热； 4.溶质与管壁间的相互作用 存在吸附与疏水作用，造成谱带展宽； 蛋白质、多肽带电荷数多，有较多的疏水基，吸附问题特别严重，是目前分离分析该类物质的一大难题。 细内径毛细管柱，一方面有利于散热，另一方面比表面积大，又增加了溶质吸附的机会。 减小吸附的方法和途径：加入两性离子代替强电解质，两性离子一端带正电，另一端带负电，带正电一端与管壁负电中心作用，浓度约为溶质的100-1000倍时，抑制对蛋白质吸附，又不增加溶液电导，对电渗流影响不大。 5.其他影响因素 （1）电分散作用对谱带展宽的影响 当溶质区带与缓冲溶液区带的电导不同时，也造成谱带展宽；尽量选择与试样淌度相匹配的背景电解质溶液。 （2）“层流”现象对谱带展宽的影响 一般情况下，HPCE中不存在层流，但当毛细管两端存在压力差时，出现抛物线形的层流； 产生的原因：毛细管两端液面高度不同。 实际操作时，保持毛细管两端缓冲溶液平面高度相同。 第三章 高效毛细管电泳仪 high performance capillary electrophoresis apparatus 一、高效毛细管电泳仪 high performance capillary electrophoresis apparatus 二、流程与主要部件 process and main assembly 三、进样方式 injection method 一、高效毛细管电泳仪high performance capillary electrophoresis apparatus 仪器2 仪器3 * 第二章 高效毛细管电泳理论基础 basic theory of HPCE 双电层:浸没在液体中的所有表面都具备的一种特性， 通常是指两相之间的分离表面由相对固定和游离 的两部分离子组成的与表面电荷异号的离子层。 2.1 基本原理 2.1.1 双电层和Zeta电势 毛细管电泳通常采用的是石英(熔融二氧化硅)毛细管柱。在碱性和微酸性(pH2.5)溶液中，熔硅表面的硅醇基(Si-OH)电离成SiO-，使表面带负电荷。与溶液接触时，在溶液中形成紧贴熔硅表面的和游离的两部分离子。由这两部分离子组成的与表面电荷异号的离子层，形成双电层。其中的第一部分又被称为Stern层。在Stern层和双电层的游离部分的起点的边界层之间的电势为管壁的zeta电势(约在0-100mV之间)，随距离增大按指数函数衰减。 ?????????????????????????????????????????????????????????? 熔硅表面上的zeta电势正比于它表面上的电荷数与对离子层的乘积，但这些又受到对离子的性质、缓冲液pH值、缓冲液中阳离子和熔硅表面间的平衡等因素的影响。毛细管壁上的zeta电势是毛细管电泳的一个重要参数，对控制电渗流，优化CE分离条件有实际指导意义。 The level of EOF is highly dependent upon electrolyte pH as the zeta potential is largely governed by the ionisation of the acidic silanols on the capillary wall. Bel