分子生物学技术习题和答案.DOC

第5-6章 分子生物学研究方法 习题及答案 简述分子杂交的一般程序？ 1) DNA和RNA的杂交 制备DNA或RNA样品→与固定基质结合→80℃真空固定→预杂交→加入标记探针杂交→洗涤→放射自显影或显色反应。 2）蛋白质的免疫分析 制备蛋白质样品→与固定基质结合→常温空气中固定→封闭剂封闭→ 一抗反应→洗涤→二抗-酶偶联物反应→洗涤→显色反应（EIA） 或 → 一抗放射标记物→洗涤→放射自显影（RIA） 简述Southern blotting基本方法？ 将DNA标本用限制性内切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段； 经碱变性，Tris缓冲液中和，高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素滤膜上，烘干固定，凝胶中DNA片段的相对位置在DNA片段转移到滤膜的过程中继续保持着。 附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自显影术确定探针互补的每条DNA带的位置，确定在众多酶解产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。 分子杂交检测常用的探针类型有---------？ 分子杂交检测其互补序列的标记DNA或RNA序列，能在许多DNA或RNA序列的复杂混合物中识别所需克隆的分子。 DNA探针(DNA probe) RNA探针(RNA probe) 简并探针(degenerate probe) 生物芯片的一般类型包括那些，举例说明？或填空？ 1. 按照芯片基质上固定的生物材料的不同，可以将生物芯片划分为DNA或基因芯片、蛋白质芯片、RNA芯片、细胞芯片、组织芯片、芯片实验室(Lab on chip)。 如果芯片上固定的是肽或蛋白，则称为肽芯片或蛋白芯片； 如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA，就是DNA芯片。 根据生物化学反应过程，又可以将生物芯片进行另外一种分类：因为通常的生物化学反应过程包括三步：即样品的制备、生化反应、结果检测和分析。 所以我们可以根据这三个不同的步骤，把生物芯片分为不同的类型即用于样品制备的生物芯片，生化反应生物芯片及各种检测用生物芯片等。 按照芯片上基因探针的密度又可将基因芯片分为高、中、低密度三种。 按照芯片上固定的核酸大小可以分为三种类型、两种模式：寡核苷酸芯片、cDNA芯片和基因组芯片。 对于人类来说，SNP的意义在于哪些？ １、致病SNP ２、疾病易感性SNP ３、具有诊断价值的SNP ４、疾病的SNP谱 ５、人表型相关SNP ６、药物作用与不良反应的SNP ７、药物剂量SNP 请解释什么是基因组DNA文库(genomic DNA library)？ 利用限制性核酸内切酶将组织或细胞染色体DNA切割后，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有基因组DNA信息，总称基因组DNA文库 cDNA文库(cDNA library)：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有cDNA信息，总称cDNA文库 。常用于筛选编码蛋白质的结构基因。 请简述构建基因文库的基本程序？ 1)提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA； 2) DNA片段或cDNA片段与经特殊处理的载体连接形成重组DNA； 3)重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌； 4)阳性重组菌落或噬菌斑的选择。 简答？一个理想的基因组DNA文库应具备下列条件？ 重组克隆的总数不宜过大，以减轻筛选工作的压力 载体的装载量最好大于基因的长度，避免基因被分隔克隆 克隆与克隆之间必须存在足够长度的重叠区域，以利克隆排序 克隆片段易于从载体分子上完整卸载 重组克隆能稳定保存、扩增、筛选等后续操作 自身引导合成第二链的原理怎样？ ?? 首先用氢氧化钠消化杂合双链中的mRNA 链，解离的第一链 cDNA 的 3‘-末端就会形成一个发夹环（发夹环的产生是第一链 cDNA 合成时的特性，原因至今未知，据推测可能是由帽子的特殊结构相关）， 这个发夹结构可以作为引物并引导 DNA 聚合酶复制出第二链，此时形成的双链之间是连接在一起的，再利用 S1 核酸酶将连接处切开（仅该位点处为单链结构，切断形成平端结构，可以进行后续连接反应） 。 在PCR时，简述前三个周期中的重要变化？ 第一周期中，合成的每一条新生链都超出了另一个引物的位置；在第二个周期中， 通过同样的变性、复性、延伸步骤，进行新一轮的扩增，以第一周期中合成的DNA 为模板合成的DNA位于两引物位置之间，这就是所需扩增的特异DNA片段；在第三个 周期中，经过同样的变性、复性、延伸步骤进行扩增， 在第三个周期中，经过同样的变性、复性、延伸步骤进行扩增，以第二轮中的新生链 为模板，就形成特异DNA双链，以后每增加一轮，它扩增一