两种冷冻方法保存造血干细胞技术的评价.pdfVIP

· 36· 医药论坛杂志 2008年2月 第 鲞 箜 两种冷冻方法保存造血干细胞技术的评价 王桂叶，孙 慧，张秋堂 郑州大学第一附属医院血液科 郑州市 450052 关键词 造血干细胞；冷冻；程控降温；一80℃冷冻保存 中图分类号：R457．7 文献标识码：B 文章编号：1672—3422(2008)03-0036-02 骨髓移植已经成为治疗恶性血液病及实体瘤等 摇动，以利散热(操作在冰浴中进行)。混匀分2～ 疾病的有效手段，我室分别采用传统的造血干细胞 3袋装入上海中心血站产的真空血袋中，每袋体积 体外保存方法(程控降 液氮贮存)和一80~C冷冻 不超过80ml。为防止停电时标本温度升高，把标 保存外周血造血干细胞技术…。现介绍如下： 本埋入干冰盒中，再将干冰盒放入一80℃冰箱中。 病人预处理5～7d后，干细胞放入37℃～43℃水 1 材料与方法 浴中快速复温，轻轻摇动，直至肉眼看不到块状 1．1 材料 外周血造血干细胞65份，取自我院 物，回输人体，利用袋内残留干细胞做单个核细胞 1995年3月一2007年9月自体造血干细胞移植患 记数，台盼兰拒染率，以及培养 。 者，每份50～60ml，冷冻保存200～250ml，随即分 2 结果 成两组，液氮组和一80~C冷冻组，液氮组30例， 一 80~C冷冻组35例。年龄15～48岁，中位数33 采用一80~C冰箱保存的人体外周血造血干细 岁，男37例，女28例。 胞保存时间不超过两年，计数冷冻前后有核细胞 1．2 方法 数，CFU—GM、BFU—E及台盼兰拒染。一80~C冰 1．2．1 主要仪器 ①超净工作台，国产。②CO 箱保存优于传统的保存方法见表1。 培养箱，美国。③冷冻袋，美国 Baxter公司。 表1 液氮与CP一1冷冻后干细胞变化 ④一80~C冰箱，日本。⑤液氮罐，国产。⑥程控降 温仪，美国。 1．2．2 主要试剂 ①CP一1主要成分DMSO，羟乙 基淀粉(HES)，日本。②RPMI1640(Gabco USA)。 @DMSO，日本。@ACD保护液，上海中心血站。 1．2．3 方法 第一疗程完全缓解的血液病病人， 3 讨论 经4～6个疗程强化治疗，停化疗20d左右，查血 象：白细胞4～10×10 ／L，无幼稚细胞，骨髓分类 传统的保护剂为DMSO，一80~C保存的保护剂 正常。经环磷酰胺诱导出外周血造血干细胞，经 为CP一1主要成分DMSO，羟乙基淀粉(HES)。 CS一3000型造血干细胞采集仪(Baxter)收集造血 DMSO为一种渗透性保护剂，在水中易结合水分子 干细胞50ml，计数单个核细胞，测CD34 造血干细 发生水合作用，使溶液黏度增加，冰点降低，冷冻 胞细胞数，台盼兰拒染率，取0．5ml细胞培养。余 过程延缓，确保细胞有充足时间适应降温变化，以 下①液氮组用RPMI 1 640液调细胞浓度为2～4× 减少降温损伤。另外，DMSO进入细胞，提高了细 10 个／ml(ACD保护液7．5ml，，肝素2500u)混匀 胞内离子浓度，使胞内压接近胞外压，降低细胞脱 分2～3袋装入上海中心血站产的真空血袋中直接 水的速度和程度。HES为非渗透性保护剂，不易 程控降温放入液氮中贮存。②一80％冷冻组用