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膜片钳技术原理和应用 膜片钳技术原理和应用 马普科学仪器有限公司 广州寺右新马路4号长城大厦1419室(邮编:510600) Tel：020-8767 9617，8767 9631 Fax：020-8767 9635 E-mail: info@ 第一部分 膜片钳技术研究概况 1976年德国马普生物物理研究所Neher和Sakmann创 建了膜片钳技术 （patch clamp recording technique ）。这 是一种以记录通过离子通道的离子电流来反映细胞膜单 一的（或多个的离子通道分子活动的技术）。以后由于 吉欧姆阻抗封接(gigaohm seal, 109 Ω)方法的确立和几种方 法的创建。这种技术点燃了细胞和分子水平的生理学研 究的革命之火，它和基因克隆技术（gene cloning ）并架 齐驱，给生命科学研究带来了巨大的前进动力。 这一伟大的贡献，使Neher和Sakmann获得1991年度 的诺贝尔生理学与医学奖。 一、膜片钳技术发展历史 1976年德国马普生物物理化学研究所Neher和Sakmann首 次在青蛙肌细胞上用双电极钳制膜电位的同时，记录到 ACh激活的单通道离子电流，从而产生了膜片钳技术。 1980年Sigworth等在记录电极内施加5-50 cmH O 的负压 2 吸引，得到10-100G Ω的高阻封接（Giga-seal ），大大降 低了记录时的噪声实现了单根电极既钳制膜片电位又记 录单通道电流的突破。 1981年Hamill和Neher等对该技术进行了改进，引进了膜 片游离技术和全细胞记录技术，从而使该技术更趋完 善，具有1pA的电流灵敏度、1 μm 的空间分辨率和10 μs 的时间分辨率。 1983年10月，《Single-Channel Recording》一书问世，奠 定了膜片钳技术的里程碑。Sakmann 和Neher也因其杰出 的工作和突出贡献，荣获1991年诺贝尔医学和生理学 奖。 二：膜片钳技术原 膜片钳技术是用玻璃微电极吸管把只含1-3个离子通 道、面积为几个平方微米的细胞膜通过负压吸引封接起 来，由于电极尖端与细胞膜的高阻封接，在电极尖端笼 罩下的那片膜事实上与膜的其他部分从电学上隔离，因 此，此片膜内开放所产生的电流流进玻璃吸管，用一个 极为敏感的电流监视器（膜片钳放大器）测量此电流强 度，该电流强度就代表单一离子通道电流。 膜片钳技术原 三：膜片钳技术的意义 膜片钳技术的建立，对生物学科学特别是神经科学是 一资有重大意义的变革。这是一种以记录通过离子通道的 离子电流来反映细胞膜单一的（或多个的离子通道分子活 动的技术。些技术的出现自然将细胞水平和分子水平的生 理学研究联系在一起，同时又将神经科学的不同分野必然 地融汇在一起，改变了既往各个分野互不联系、互不渗 透，阻碍人们全面认识能力的弊端。 这一技术的发现“和基因克隆技术并架齐驱，给生命 科学研究带来了巨大的前进动力。 第二部分 膜片钳技术的应用 一：应用学科 膜片钳技术发展至今，已经成为现代细胞电生理的常规 方法，它不仅可以作为基础生物医学研究的工具，而且直 接或间接为临床医学研究服务， 目前膜片钳技术广泛应用于神经（脑）科学、心血管科 学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物 细胞生理学、运动生理等多学科领域研究。 随着全自动膜片钳技术（Automatic patch clamp technology ）的出现，膜片钳技术因其具有的自动化、高 通量特性，在药物研发、药物筛选中显示了强劲的生命 力。 二：应用的标本种类 使用的标本种类繁多。从最早的肌细胞（心肌、平 滑肌、骨骼肌）、神经元和内分泌细胞发展到血细胞、 肝细胞、耳窝