幽门螺旋杆菌抗原及CTB融合基因在烟草、番茄中的遗传转化.pdf

1_r 776475 洳；{j、唼 硕士掌位论文 幽，1螺旋杆菌抗原和CTB融合基因在烟 草、番茄中的遗传转化 作者姓名——篮—垒———一 指导教师j 盎遮丝控 学科(专业) 焦盟芏 所在学院 生宝盎生茔隆 提交目期 三奎壅垂生点昱 本研究得到 浙江省自然科学基会重点项目 舞a 貉耄汉省科技厅项霉 资助 Thiswork was supported参≯ 一一 y of Province ScienceFoundation Nmure Zhejiang and Province Science ofZhejiang TechnologyDepartment 摘要 胃癌和胃粘膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的发生也密切相关。目前多种药物联合治疗根除Hp 存在疗效欠理想、副反应高和Hp耐药菌株不断增加等问题，疫苗有望为防治Hp感染提供一种 proteinA，CagA)是Hp的主要毒力 新的途径。细胞毒素相关蛋白(Cytotoxin—associated 因子，常与HD空泡毒素(VacA)伴随存在，具有强免疫原性和免疫保护性，是Hp疫占的首选 抗原之一。Hp尿素酶(Urease)作为Hp的定植因子和毒力因子．表达量高，序列高度保守，其 中以B亚单位(UreB)抗原性和保护作用最强，是Hp免疫防治的主要候选疫苗之一。霍乱毒 素B亚单位(CTB)是霍乱毒素的1F毒性部分，有很强的免疫原性，作为免疫佐剂能增强抗原蛋 白的免疫效力和免疫特异性。用植物作为生物反应器米生产重要的、有经济价值的药用蛋白是 “分子农业”发展的新趋势。多方面的报道证明植物可以高水平表达具有功能的重组蛋白质。 烟草是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一，生长速度快，生K=周期短，农杆菌介导的遗 传转化体系完善，因此广泛应用于植物疫苗的基础研究和前；cIj研究。番茄营养丰富，果实可直 接生食，是研制植物口服疫苗的理想载体。 表达载体，采用农杆菌介导的叶盘转化法，将融台基因转入烟草和番茄中，以期获得同时表达 Hp 安全的功能性食品奠定基础。同时优化番茄的转化体系，为建立以烟草和番茄作为生物反应器 来表达微生物抗原奠定了技术平台。 通过两年多的实验，获得了以下结果： (1)构建能在烟草和番茄基因组中高效表达的古外源融合基因的植物表达载体p13-CC．N、 35S启动子启动，PCR分析、 p23-35SCLUN、p23-35SCLCN和p121一CLUN，由CaMV (2) 以检测融合蛋白的原核表达情况： (3)利用农杆菌介导的遗传转化系统将融合基因导入烟草和番茄基因组中，经过抗性筛选、 分化和生根培养获得了转基因烟草和番茄植株。转化后烟草叶片抗性芽分化率可高达 100％，优化条件后番茄抗性芽分化率达40％～60％。 (4)PCR验证目的基因已整合到烟草和番茄基因组中，PCR阳-陛率为80％～937％。 Western-blot检测目的蛋白在转基因植株的含量及表达