帕金森病铁代谢异常的脑区差异及细胞易感性差异研究.pdf

摘 要 帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是最常见的中枢神经系统退行性疾病之一， 仅次于阿尔茨海默症(Alzheimer’S disease，AD)。临床表现主要包括静止性震颤、 运动迟缓、肌僵直和姿势步态障碍等运动症状，同时患者可伴有抑郁和睡眠障碍 等非运动症状。其主要病理改变为黑质(substantia DA)能神经元的变性死亡，由此而引起的纹状体DA含量显著性减少。目前，PD 的确切病因仍不清楚，包括遗传因素和非遗传因素。非遗传因素中，氧化应激、 线粒体功能障碍、炎症、蛋白异常聚集、凋亡、铁的过度沉积等均可能参与了PD 多巴胺能神经元的变性死亡过程。在这些病因中，铁的异常聚集越来越受到研究 人员的关注，之前大多研究都把焦点放到了黑质本身，很少关注其他脑区的铁代 谢情况。而黑质过多的铁究竟来源于哪里?是否来源于其他脑区?本研究在正常 人和PD病人死后的脑组织中，应用ICP方法，测定了大脑颞叶皮层铁、锰、镍 和铜四种过渡金属元素的含量，并且应用免疫印记法观察了该脑区铁转运相关蛋 1，DMTl)，转铁蛋白受体 白，二价金属离子转运蛋白．1(divalentmetaltransporter ．1(transferrin 1(FPNl)的表达变化， receptor1，T瓜1)和铁转出蛋白ferroportin 1，IRPl)的变 同时观察了其共同的调节蛋白铁调节蛋白(ironregulatoryprotein 化。同时应用AD脑组织标本作为阳性对照。 血红素加氧酶．1(heme 检结果证实，PD病人SN区的星形胶质细胞和Lewy小体中HO一1水平较正常人 明显增高，提示HO．1在PD病理过程中发挥了重要作用。HO-1能够分解血红素 生成游离的铁，一氧化碳和胆绿素。后两者在体内有强的还原活性而对细胞起到 保护作用，而游离铁可能通过Fenton反应加重氧化应激损伤。目前的研究多集中 于HO．1表达调控对细胞的保护性作用，而HO．1在这两种细胞中的表达方式及作 用是否有差异，其是否参与了PD中神经元和胶质细胞的不同易感性没有相关研 究报道。本实验应用原代细胞培养、免疫印迹、流式细胞术、激光共聚焦扫描技 术等多项研究方法，观察了神经毒素1．甲基．4．苯基吡啶离子 membrane potential，△甲m)的变化。研究结果如下： l、PD组颞叶皮层Fe含量为110．30±3．98 Ni和Cu的含量，PD组和AD组较正常组均无明显变化。 (PO．05)。AD组无明显变化。 h、4h、12h、24 3、100州MPP+处理体外培养的VM神经元1 h，HO．1蛋白表 达水平于24 min、2h、4h、12 0【．突触核蛋白处理30 h、 h时开始升高。5}-tg／ml 24 h、48 h，HO-1表达水平于12h时开始升高，且于24 h到达峰值，48h下降。 min、1 4、100州MPP+或5I-tg／ml0【．突触核蛋白处理体外培养的星形胶质细胞30 h、2h、4h、8h、12h、24 h，HO-1表达水平于1 h时开始升高，并于12h到达 高峰。 5、100 MPP+处理VM神经元4 h， rtM