布氏锥虫eIF4E蛋白的表达纯化及晶体生长.pdf

布氏锥虫eIF4E蛋白的表达纯化与晶体生 长 ㈣圳…川I||ll删删4㈣圳咖 Y2578322 ～ 摘要 论文由布氏锥虫eIF4E蛋白和斑马鱼M025蛋白初步晶体学研究两部分组 成。 布氏锥虫属动基体目、锥虫科中的锥虫属，是致病的鞭毛原虫寄生，可引发 严重的传染病。在人类中主要为昏睡病，南美锥虫病和利什曼病，流行于非洲， 通过采采蝇传播。对人类和其他动物健康造成极大的干扰。目前，对这些寄生虫 有效的疫苗的开发仍是一个难以实现的目标，而临床治疗手段仅限于化疗。常规 药物的成本，毒性和抗药性问题导致迫切需要确定和开发新的治疗方向，而此关 键是确立新的先导结构和新的药物靶标。 translation 真核细胞翻译起始因子4E(eul(aryotic 最初发现时为分子量为25KD的多肽。主要分布在细胞胞质内，细胞核内分布少 量，与倒[矾A的5’端帽子结构特异性结合，在帽子依赖性翻译和mI斟A输出 发挥重要的调控作用。它多以游离或形成复合物存在，它能被其他蛋白所调节， 如与支架蛋白eIF4G结合作为eIF4F复合物的一部分介导发挥其功能以及能够结 合eIF4E蛋白远端背侧表面到帽子结合位点，并能调节帽子结合活性4EBPs (eIF4E binding 型(TbeIF4E1—4)，同时它们在生物体内，行使不同功能。 目前布氏锥虫的eIF4E蛋白结合相关蛋白和调控翻译过程的途径仍然不清 晰。因此我们构建了布氏锥虫eIF4E1(1．233aa)．C．His-pET22b， 1 eIF4E2(1—25 SDS．PAGE检测后收集纯度较高较均一的蛋白坐滴气象扩散法进行晶体生长。 T M025是一种保守的支架蛋白，它与假激酶STRAD共同激活肿瘤抑制基因 (DrM025)蛋白，然后采用X射线衍射，获得晶体衍射分辨率达到2．9A。此 结构属于空间群为尸3221，晶胞参数为口=6=156．665A，c=221．251A。此外， 通过分子置换的方法对斑马鱼M025的结构进一步确认。斑马鱼M025由七个 重复的螺旋组成，通过结构对比表明斑马鱼与人的M025整体结构非常相似。 我们的工作为M025的进一步的功能和进化研究提供了一个结构基础。 关键词：布氏锥虫eIF4E；重组表达纯化；晶体生长；斑马鱼M025；晶体 结构 ● ■憎 J● 1 ，_一l 『l11e ancI of brucei crystallization Trypanosoma elF4E Abstract Thisthesiscontainstwo recombinant of parts：the proteinexpression bruceielF4Eandthe structureresearchofZebrafish Trypanosoma crystal M025． to of bl。ucef，which Trypanosoma be