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奶制品氮含量测定技术的研究毕业论文 目 录 摘要 I Abstract II 第1章 绪论 1 1.1 课题背景 1 1.2 蛋白质测定方法概述 2 1.2.1 凯氏定氮法 2 1.2.2 双缩脲法(Biuret法) 3 1.2.3 福林-酚试剂法（Lowry法） 5 1.2.4 考马斯亮蓝法（Bradford法） 6 1.2.5 高效液相色谱法（HPLC） 7 1.3 课题研究的意义 8 1.4 课题研究的主要内容 9 第2章 实验材料及方法 10 2.1 用凯氏定氮法测定牛奶中的蛋白质含量 10 2.1.1 实验仪器及药品 10 2.1.2 实验操作及步骤 10 2.2 双缩脲法测定牛奶中的蛋白质含量 12 2.2.1 实验仪器及药品 12 2.2.2 实验操作及步骤 12 2.3 考马斯亮蓝法测定牛奶中的蛋白质含量 15 2.3.1 实验仪器及药品 15 2.3.2 实验操作及步骤 15 2.4 反相高效液相色谱法测定牛奶中的三聚氰胺及尿素的含量 18 2.4.1 实验仪器及药品 18 2.4.2 实验操作及步骤 18 第3章 实验结果与分析 21 3.1 凯氏定氮法的实验数据处理及结果分析 21 3.1.1 实验数据及处理 21 3.1.2 实验结果及分析 22 3.2 双缩脲法的实验数据处理及结果分析 22 3.2.1 样品掺杂处理中所需尿素和三聚氰胺溶液的浓度计算 22 3.2.2 标准蛋白曲线的绘制 22 3.2.3 双缩脲法对掺杂尿素溶液的未知样品溶液中的蛋白质含量的测定 23 3.2.4 双缩脲法对掺杂三聚氰胺的未知样品溶液中的蛋白质含量的测定 25 3.3 考马斯亮蓝法的实验数据处理及结果分析 26 3.3.1 样品掺杂处理中所需尿素和三聚氰胺溶液的浓度计算 26 3.3.2 标准蛋白曲线的绘制 26 3.3.3 考马斯亮蓝法对掺杂尿素的未知样品溶液中的蛋白质含量的测定 28 3.3.4 考马斯亮蓝法对掺杂三聚氰胺的未知样品溶液中的蛋白质含量的测定 29 3.4 反向高效液相色谱法的实验数据处理及结果分析 30 3.4.1 尿素标准曲线和三聚氰胺标准曲线的绘制 30 3.4.2 反向高效液相色谱法测样品中的尿素和三聚氰胺 33 结论 36 参考文献 37 致谢 40 附录1 开题报告 41 附录2 文献综述 44 附录3 中文译文 47 附录4 外文原文 56 第1章 绪论 1.1 课题背景[1-3]。其掺杂的方式也是多种多样的，总结起来有以下几种情况：掺入非蛋白成分(尿素，三聚氰胺，乳脂肪，乳糖等)以使奶制品中的蛋白氮含量增加；掺入杂蛋白(大豆粉，明胶等)以使奶制品中的蛋白质的种类增加；掺入价格低廉的乳源蛋白如乳清粉等以使奶制品的成本降低；掺入其他动物乳汁以降低奶制品的成本。这种在牛乳中掺杂使假的行为不仅极大损害了广大人民群众的身体健康和切身利益，同时也大大降低消费者对乳品企业和乳品质量的信任，甚至使政府在人民心目中的形象遭到破坏。例如2008年的三鹿奶粉事件所造成的后果和社会影响说明，乳品质量好坏与否不仅关系到婴幼儿和青少年的健康成长，也关系到无数家庭的幸福、社会的和谐以及我们国家的形象。虽然这些年来我们国家一直都在不停地打假治假，但是这种掺假造假的现象迄今都是禁而未止，掺杂使假的情况时不时的浮出水面，乳制品的质量安全问题也已经引起了全社会的普遍关注。 1.2 蛋白质测定方法概述 蛋白质是乳及乳制品中的主要成分，是牛乳中最重要的特征营养成分，乳及乳制品中蛋白质含量是必测指标[4]。因此，近年来，人们发展了许多测定蛋白质的方法。目前蛋白质的测定方法主要有凯氏定氮法、分光光度法、和滴定法等[5]。其中分光光度法又包括：双缩脲法，考马斯亮蓝法，福林-酚试剂法、BCA法和紫外吸收法等，滴定法包括有甲醛滴定法、pH滴定法等。近些年来，色谱技术也开始用于蛋白质含量的检测之中。 1.2.1 凯氏定氮法 我国国家标准中测定食品中蛋白质(GB/T5009．52003)[6]有2种方法:凯氏定氮法和比色法。其中，凯氏定氮法是国家标准和国际标准中首推的蛋白质的检测方法。 凯氏定氮法（其装置图如下图1-1）的基本原理是将含氮的有机物与浓 图1-1 凯氏定氮法消化、蒸馏装置 硫酸共同加热,反应过程中样品中的碳、氢等元素被氧化成二氧化碳和水而逸出,有机氮转化为氨,并且进一步与硫酸结合生成硫酸铵，通常称此过程为“消化”。但是这个反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾来提高反应液的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂,以促进反应的进行,指示消化终点的到达。消化之后向消化液中加入浓碱，浓碱可以使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,水蒸气将产生的氨蒸馏到一定量一定浓度的硼酸溶液中,该过程被称为“碱化蒸馏”。硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子的浓度