专题5课题1DNA的粗提取与鉴定课件.ppt

专题五  DNA和蛋白质技术 目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 阅读54页至55页第二段，思考： 1、DNA从哪提取？ 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3、怎样鉴定我们提取的DNA？ ①析出：将处理后的滤液，加入冷却的酒精溶液（95%），静置后，溶液中会出现 ，即为DNA。 P55旁栏思考题 1、为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 2、加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 3、如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 4、此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 5、为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ * 【考纲展示】 1.DNA的粗提取与鉴定 2.PCR技术的基本操作和应用 3.蛋白质的提取和分离 【热点考向】 1.DNA粗提取的原理、方 法和注意事项 2.DNA的鉴定 3.PCR技术操作及原理 4.蛋白质提取的原理和 方法 课题1 DNA的粗提取与鉴定 一、DNA的粗提取与鉴定 1.实验原理 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的 溶液中溶解度不同,DNA在 的NaCl溶液中的溶解度最低。 ②DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些 则溶于酒精。 ③蛋白酶能水解 ，但对 没有影响 ④大多数蛋白质不能忍受 的高温，而DNA在 才会变性。 ⑤洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响 NaCl 蛋白质 蛋白质 DNA 细胞膜 0.14 mol/L 60～80℃ 80℃以上 溶解规律 2 mol/L NaCl溶液 0.14 mol/L NaCl溶液 DNA 蛋白质 NaCl溶液物质的量浓度从2 mol/L降低过程中，蛋白质的溶解度逐渐增大 溶解 析出 溶解度 溶解 部分发生盐析而生成沉淀 现配现用 鉴定DNA 双缩脲 试剂 斐林试剂 紫色 水浴加热出现砖红色沉淀 碘液 刚果红 酚红指示剂 蓝色 出现透明圈 变红 健那绿 醋酸洋红 龙胆紫 蓝绿色 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 （一）实验材料的选取 材料：新鲜的鸡血 注意： 本实验中，要往鸡血中加入柠檬酸钠溶液 选用 相对较高的生物组织。 DNA含量 下面的生物材料适合做DNA的提取吗？为什么？你打算用什么实验材料？ 猪肝、花椰菜、鸡血、哺乳动物的红细胞、菠菜、大肠杆菌； 防止血液凝固。 制备鸡血细胞液 取0.3g/mL的柠檬酸钠溶液10mL，与100mL新鲜鸡血混匀，然后静置一天或离心机离心2~3min，除去上清液。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、破碎细胞 2、过滤，获取含DNA的滤液 动物：放入一定量的 中，并用玻璃棒搅拌 植物：先用 溶解细胞膜，再加食盐充分 搅拌和研磨 蒸馏水 洗涤剂 溶解DNA 使细胞吸水涨破，释放出DNA。 方法一：利用DNA在不同浓度的 中溶解度不同，通过控制NaCl溶液浓度去除杂质。 NaCl溶液 2mol/L的NaCl 0.14mol/L的NaCl DNA溶解，取滤液 DNA析出，取黏稠物 (3)去除滤液中的杂质 2mol/L的NaCl DNA溶解 40mL 2mol/L的NaCl溶液 含杂质的DNA 含杂质较少的DNA 含杂质较少的DNA 降低NaCI的浓度，析出DNA。 (3)去除滤液中的杂质 方法二：加入 分解蛋白质。 方法三：将滤液放在 的恒温水浴箱中保温10～15 min。 60～75℃ 嫩肉粉 白色丝状物 (4)DNA析出与鉴定 析出较高纯度 的DNA ②鉴定：用 mol/L的NaCl溶解DNA，加入 试剂，沸水浴加热5min，观察溶液是否变 。 二苯胺 2 蓝 (4)DNA析出与鉴定 5mL 2mol/L NaCl 关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验装置如图： 据图回答下列问题。 (1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血。主要原因是鸡血细胞液中　　　　含量较高。 (2)在图A所示的实验步骤中加蒸馏水20 mL的目的是 ，通过图B所示的步骤取得滤液，再在滤液中加入2 mol/L－ 1 NaCl溶液的目的是　　　　　　　　 。图C所示实验中加蒸馏水的目的 。 DNA 使血细胞吸水胀破，放出DNA 使滤液中的DNA溶