流式细胞术进行油菜倍性分析的探究-成都农林科学院.DOC

流式细胞技术鉴定油菜倍性的研究 王振宇1，2付绍红1 许明超1，2 牛应泽2 李云1， 杨进1 王继胜1 陈晓华1， 邹琼1 陶兰蓉1 康泽民1 唐蓉1 张汝全1,*， 成都市农林科学院，国家油菜改良中心成都分中心,成都温江， 611130） 四川农业大学农学院，油菜研究中心,成都温江，611130） 摘要：本研究利用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）鉴定经秋水仙碱作加倍处理油菜的倍性水平，并用传统细胞压片观察计数染色体方法对其结果进行了验证；结果表明，三倍体植株G1期峰值为360000道，四倍体植株G1期峰值为480000道，加倍后六倍体植株G1峰值为720000道，八倍体G1期峰值为960000道，并对不同倍性植株根尖进行染色体压片鉴定，其结果与流式细胞检测法结果一致，且染色体倍性水平与核DNA含量成正相关关系，说明流式细胞术的高效准确，且检测过程简单快捷，对于大量鉴定具有明显优势。 关键词：油菜；流式细胞术；倍性鉴定；染色体加倍 The Study on Ploidy Analysis of rapeseed Chromosome by Flow Cytometry WANG Zheng-yu, FUShao-hong,XU Ming-chao,NIU Ying -ze,LI Yu, YANG Jing,WANG Ji-sheng,CHEN Xiao-hua,ZOUQiong,TAO Lan-rong,KANG Ze-ming,TANG Rong, ZHANG Ru-quan. Abstract:In this study, flow cytometry (Flow Cytometry,FCM) identified by colchicine treatmentfor doubling ploidy rapeseed and observed by conventional tabletting cell chromosome counting method to verify their results.The results showed that the triploid plants G1 phase peak of 360,000, tetraploid G1 phase peak of 480,000, doubling hexaploid plants G1 peak of 720,000, octoploids G1 phase peak at 960,000, and the different root tip of chromosome ploidy tablet identification, and the results were consistent with the flow cytometry assay and chromosome ploidy level and nuclear DNA content were positively correlated, indicating that the efficient and accurate flow cytometry, and the detection process is simple and fast, for a large number identification has obvious advantages. Key words: rapeseed;Flow Cytometry;Ploidy Determination,Chromosome doubling 油菜是世界四大主要油料作物之一，属于十字花科（Cruciferae）芸薹属（Brassica），包括甘蓝型油菜（Brassica napus）、白菜型油菜(Brassica campestris)、芥菜型油菜(Brassica juncea)3个栽培种[1]。利用种间杂交培育或拓宽油菜遗传资源是油菜新品种选育的主要手段之一，种间杂交F1不易得到自交后代，通过染色体加倍可以得到F1的自交后代[2-4]。同时，使用和培育多倍体油菜使它们产生满足人类需求的各类新的性状，也已成为育种家们追求的目标[5]。倍性鉴定对植物的遗传育种有非常重要的辅助作用，而倍性鉴定的方法有多种。可以通过细胞学或形态学进行鉴定，多以准确性最高的细胞压片观察计数染色体方法确定植物倍性水平为主[6]。今年来随着现代科学技术的发展，基于激光技术、光电测量技术、计算机技术、流体力学以及细胞免疫荧光化学技术为主的流式细胞技术得到了飞速发展，并大量在生物学得到运用。在20世纪70年代发展起来的新型高科技检测仪器，流式细胞仪( Flow cytometr