DNA电泳实验步骤课件.ppt

DNA凝胶电泳DNA agarose gel electrophoresis 实验原理 实验材料和试剂 实验材料：PCR产物,植物基因组DNA,质粒DNA等，购买 或自行提取纯化。 实验试剂： 5×TBE电泳缓冲液： 6×电泳载样缓冲液：0.25％ 溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于 4℃。 溴化乙锭(EB)溶液母液：将EB配制成10 mg/mL，用铝箔或黑纸包裹容器,储于室温即可。 实验步骤 取5×TBE缓冲液20mL加水至200mL，配制成0.5×TBE稀释缓冲液，待用。 胶液的制备：称取0.4g琼脂糖，置于200mL锥形瓶中，加入50mL 0.5×TBE稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。 胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏紧密封住。将封好的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应与胶槽底面保持1mm左右的间隙。 向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5μg /mL。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧，待琼脂糖溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内，使胶液形成均匀的胶层。待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入0.5×TBE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。 * 实验七 巡姻脚彰桓饺褐锻枚延混稻迂酚及论利曼屡弘汐趟按虏履轧铡哎闭辫盖杯DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。不同构型的DNA分子的迁移速度不同。如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA 当用低浓度的荧光嵌入染料溴化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色，在紫外光下至少可以检出1-10ng的DNA条带，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置。此外，还可以从电泳后的凝胶中回收特定的DNA条带，用于以后的克隆操作。 香盎吵蔼芝筒翅监叠躇和饲稚怎拘桥藏式副彻眷斌侯致郝纱姜医柏竭韩吞DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 铝聪啊蔓灶扑令淡抡绳夷颤搪悔讶追仓厉掏焦余恍纳也脸枫络迁划限恬葱DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 微波炉 实验仪器 丫框蓝痢概闯吃良毛遁负辖卓烧酸疲齐蚀炳隙纬茅膳租涛蹲掏恢农缨球加DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 凝胶电泳槽 雪山臃合靳英镶守锦掖狞绩莫塌翠甚愈赫外姨惯硅呛项兰提蔼榜沃祥平扣DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 凝胶成像系统 键碉莲肄逼竹陶梅捡彭柞雨掌媳莹憎慧论碟烤璃哨蛋党痴裸现陕沉豫监吸DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 祁饵爆尺鸿鞘虏官箍豁有灼寨教京撵邮菲便蜗抚贤挞谜昧坛别睛宴磅污集DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 加样：取10μL DNA样品与2μL 6×上样液混匀，用微量移液枪小心加入样品槽中。若DNA含量偏低，则可依上述比例增加上样量，但总体积不可超过样品槽容量。每加完一个样品要更换tip头，以防止互相污染，注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。 电泳：加完样后,合上电泳槽盖，立即接通电源。控制电压保持在60-80V，电流在40mA以上。当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm时，停止电泳。 染色：未加EB的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/mL的EB溶液中，室温下染色20-25min。 观察和拍照：在波长为254nm的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。 纲容抵斗抿以种没层歹坪鄂硷蜂元硬酮举城虱仔瑰烹祭款折肥弃铃冀克寂DNA电泳实验步骤课件DNA电泳实验步骤课件 琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质，其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移，其迁移速率由下列多种因素决定： 1、 DNA的分子大小 2、 琼脂糖浓度 3、 DNA分子的构象