第六章 微生物与酶制剂.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 电化学生物传感器（又称为生物电极） 光学（纤维）生物传感器 热敏生物传感器 压电晶体生物传感器等等 生物电极还可分为； 基于O2检测的生物电极 基于H2O2检测的生物电极 基于NH3检测的生物电极 基于CO2检测的生物电极 基于pH检测的生物电极 电子转移介体生物电极 直接电位免疫生物电极 酶标免疫电极等等 研究新方向-微生物传感器 呼吸活性测定型：利用固定在高分子膜上的微生物细胞的呼吸作用，测定氧气的消耗和二氧化碳的生成，从而确定被测定物质的量 电极活性测定型的微生物传感器是利用固定在膜上的微生物细胞的新陈代谢作用，测定电极活性物质的量的变化。由固定化微生物膜与生物燃料电池、离子选择电极和气体电极等组成 4． 固定化酶和亲和色谱 亲和技术的基础：是生物活性化合物生物特异信息的综合。 利用了生命现象中生物分子间特有的高亲和力、高专一性，可逆结合而设计的纯化方法 是唯一能够体现待分离物质间生物学功能差异的分离方法 5． 固定化酶与环境保护 一：环境监测 二：污染物处理。 固定化生长菌体在三废处理上的应用 应用内容 菌 体 固定化方法 毒 物 废水处理 脱氮作用 Candida tropicalis Psendomonas Putida 各种微生物混合培养 Pseadomonas sp Micrococcus deritrificans 聚丙烯酰胺胶包埋 聚丙烯酰胺胶包埋 皂土和Mg＋＋或聚 氨基甲酸乙酯海绵 活性炭吸附液膜 酚 苯 废水 亚硝酸、硝酸 6． 新能源开发中的应用 H2是重要的能源物质，虽然有许多微生物可以产生H2，但产氢系统不稳定。有人利用固定化丁酸梭菌连续产氢，稳定性比天然细胞好。 将植物的叶绿体中的铁氧还原蛋白氧化酶系统用胶原膜包被，可用于水的光介产生氢气和氧气 7． 固定化酶在基础理论研究中应用 阐明酶反应机理 揭示酶原激活机理 酶亚基性质的研究 研究蛋白质-核酸分子结构 例：用N,N-亚苯基双马来酰胺交联的肌球蛋白，手臂长度推算出活性中心两个必需巯基间的距离是1.2-1.4 nm 研究蛋白质-核酸分子结构 连续的固定化酶柱进行DNA序列分析 原理：是测定DNA聚合时，以掺入dNTP同时释放的焦磷酸判断是否发生了聚合反应，进而确定掺入的是哪种核苷酸从而推导出序列 ——该系统由连续的6个固定化酶柱组成 焦磷酸酶、DNA聚合酶、甘油激酶、己糖激酶、ATP磷酸化酶，荧光酶柱 固定化酶与基础理论  1、用固定化酶研究亚基间关系： 在适宜的条件下将寡聚体酶的一个亚基和载体偶联固定 变性并除去其他亚基 复性及活性检测 亚基重组和酶性质的测定 2、应用固定化双酶或多酶系统进行模 拟试验能获得一些有意义的结果 将己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶固定化在一起，结果观察到偶联反应的初速度显著升高，而中间产物积累达到恒态水平所需的潜伏期大大缩短甚至消失。 将上述两种酶和ATP再生系统同固定于白蛋白上，然后用能透过葡萄糖、但不能透过葡萄糖-6-磷酸的膜进行包埋，结果，在体外实现了“反抗”浓度梯度的葡萄糖的“活性运转”。 3、通过固定化技术来改变酶的特性是酶分子修饰 模拟的一个方面内容。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 四种固定化酶制备方法的特点小结 物理吸附 包埋法 共价结合法 共价交联法 制备 易 易 难 难 结合力 弱 强 强 强 酶活力 高 高 中 中 底物专一性 无变化 无变化 有变化 有变化 再生 可能 不可能 不可能 不可能 固定化费用 低 中 高 中 制法 特性 1.必须注意维持酶的催化活性和专一性 2.酶与载体结合牢固 3.载体的机械强度 4.固定化酶要有最小的空间位阻 5.载体稳定，不可与底物、产物发生反应 6.固定化酶要廉价 固定化方法与载体的选择 固定化细胞 固定化细胞是指直接将细胞固定在水不溶性载体上，在一定的空间范围内进行生命活动（生长、繁殖和新陈代谢）的细胞。 固定化细胞的优点： 1、可增殖，细胞密度大，可获得高度密集而体 积小的生产菌集合体。 2、发酵稳定性好，可以较长时间反复使用或