遗传学实验——细菌转导.pptVIP

厦门大学生命科学学院 实验目的 通过大肠杆菌噬菌体专一性转导半乳糖发酵基因学习掌握局限性转导的原理，掌握转导实验的基本方法 噬菌体介绍 噬菌体结构 噬菌体组装 λ噬菌体载体 证明遗传物质是DNA而非蛋白质的Hershey-Chase实验 溶源菌的形成 实验原理 转导定义： 以噬菌体作为媒介将一个细胞（供体）的遗传物质传递给另一个细胞（受体）的过程。 普遍性转导 P1和P2 局限性转导 λ λdg λdb 实验材料 菌株：E.coli k12(λ)gal+ k12Sgal- 用品：Eppondoff离心管(1.5ml/4.5ml) Tip枪头(1ml/200ul/20ul) 培养基(肉汤固体/半固体/加倍肉汤/EMB) 试剂：氯仿、磷酸buffer 实验步骤 噬菌体的诱导和裂解液的制备 取4ml gal+菌液至离心管，4000rpm，5min 倒去上清，加3ml磷酸buffer，震荡悬浮 将悬浮液倒入培养皿，UV照射处理10s 加入3ml加倍肉汤，37℃避光培养2h 取0.8ml培养液于小离心管，加入0.2ml氯仿剧烈震荡半分钟，6000rpm, 10min 得到的上清液即噬菌体裂解液 实验步骤 噬菌体效价测定 取10ul裂解液至990ul磷酸buffer, 震荡混