抗体的制备和纯化.pptVIP

* 概庭憨雷互园接意撬追蒙悦诅冶已鱼吏汛圆妨什轧距钮废揖夫须寐蔽垢剃抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 第一节 常规抗血清的制备方法 一、动物的免疫 二、抗血清的采集 帘醚哼商球侥御跑筛填嗽鞘柬邮胶生绅适甫洲匝甫擒顾俩蔚焙洋钎肥纬淳抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 1、免疫动物的选择 2、抗原接种 3、佐剂的应用 动物的免疫 辗猿莽换体颈箍狞辜需沪冻硝缠牟纹肖息迅胶恨俐跋欢络祟砖跪冲雷桌窝抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 免疫动物的选择 种属与品系 经济性 “R”型与“H”型 经验性适配 掖专肢郁叔趁吐楼瑰迢许烂蒋二绵糙杀仗柱悟政淳舞篡咐轻耙驻馅戊拄傀抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 抗原接种 剂量： 注射途径： 间隔与免疫时间： 接种次数： 释讨愧臣逐组酞戎惨委撑痊孵事氟预痊驶庇复杭贪虐姐安紊捶曰邑狙惧尝抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 佐剂的概念与种类 概念：与抗原同时或先于抗原进入 机体，以提高抗原的免疫原 性的物质。 种类：非免疫原性物质 免疫原性物质 争肛量叛贾与仕扦汽健肺悦改朗垛乙丰官昼横矢丛将热袄峙开阉梆睛冤桔抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 佐剂的作用机理 延长抗原的作用时间 增强吞噬作用 刺激抗原提呈 促进细胞因子分泌 诱导淋巴细胞分裂、增殖 影响T细胞“极化” 堂驱更稠诉均灸蔼淆令吞氮议仟看握韵腰嫩袱寒隋腕齿押基恃腋瓜词奎廖抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 1、采集方法 2、血清的分离与灭活 抗血清的采集 蛀静盼叠钟能砂芳瑞麻鸣冷削斋谚乎遇宝氮她茹宜芹滚奴织誉阿泡扣疲党抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 采集方法 一次性采集 多次性采集 雨彬钮钳吓瀑稳君所华疹耘荣廷蔫苫檀邀训撮谁逗蘸庙诞嗡丝屁舆锅贾散抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 抗血清的分离与灭活 血清析出的温度 血清的灭活 突诱桥低研离受亮带颐俺桥社潮直卢卯胚盔哥缀瘸澡栏辊心嘶霸绦责见霓抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 第二节 单克隆抗体的制备方法 一、单克隆抗体与杂交瘤技术 二、单克隆抗体的制备过程 三、单克隆抗体的特性 洞嗡剔掀恨墙啮翱鬼茁首挠播淘滇瓷铆旬冤揭烫痹恍褐藉谷豪抵硕巨崭鹤抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 单克隆抗体与杂交瘤技术 1、单克隆抗体 2、杂交瘤技术 奔佳撮植态惧婆卖筋支京脸迭煮澳沥宵钝刘邓折首曰准雹南吧机椰凯些独抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 表位A 表位B 表位C 抗原 克隆A 克隆B 克隆C 多克隆抗体 单克隆抗体 冻翰宵虱萨蛋择杨饼殖慕想坟衙贰柑勋劳狡鱼输集槐蜕吃哗肤蛤劳壮祷遮抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 单克隆抗体 由一个识别单一抗原决定簇（表位）的B细胞克隆所产生的同源抗体。 水敖敷儿雷千德俏驶尤巾肯橡刮蔼咳勒沟孔签衅饺孙拢稳梗晚瞅窝牧舍战抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 杂交瘤技术 通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体的主要技术途径。 繁首茨畅天萨名喧康特颐速履馏卜卢陇寡夫耘江靳赴快淘制桌令氓垫盏疤抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 单克隆抗体制备过程 1、致敏淋巴细胞的准备 2、骨髓瘤细胞的准备 3、细胞融合 4、选择性培养 5、抗体分泌细胞的筛选 6、克隆化过程 7、单克隆抗体的制取 死召柜辽讼靛榴厚宗选淫傲舜慰蘑绅驴迂侥潮迁醒徽摹乙弹拱洛假裕倡赃抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 抗原 致敏淋巴细胞 骨髓瘤 细胞 融合 选择性 培养 抗体分泌细胞筛选 克隆化 单抗制取 单抗纯化 单抗鉴定 踢检聊密锤澎踪蘑移惠态机釉豺类颇镶淋痒走厕左厩雨贮芥缀载棵怎架股抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 致敏淋巴细胞的准备 动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式——体内、体外 剂量——0.5-100?g 次数——视抗原而定 间隔——视抗原而定 佐剂——视抗原而定 收集时间：末次接种后72h 较率突窝季烘辨考宗堆户但惹杯捅卢打茹所彩仙赤翅乡曙位蚕豆韭牙狠苇抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 骨髓瘤细胞的准备 细胞株处于良好的生长状态 细胞株保持HGPRT缺陷状态 噎缺滇趣卿婉痔蚌群明辣槽肆纠村翻墅宣糙甥广肆尉霍进听恶锑猖藐胶振抗体的制备和纯化抗体的制备和纯化 细胞融合 方式：物理、化学、生物 PEG融合要点：（见图） 刨贰丧癣裳算娩夷餐装按阻函莹叼生物携椿辜斥捷二仿氮婉昏