实验二十二生物巨分子热力学实验.PDFVIP

國立中興大學物理系 生物物理實驗 95學年度 實驗二十二 生物巨分子熱力學實驗 東華大學物理系 作者：葉旭成 助教 張家靖 教授 實驗目的 蛋白質在某種機制下而產生如立體結構上的改變、溶解度降低、生物活性喪 失、及結晶能力消失等，我們即稱之為蛋白質變性（denaturation ）。其變性後所破壞 的通常是穩定蛋白質結構的作用力，而並不會影響蛋白質的一級結構。 要將蛋白 質變性的方式很多，包含了物理方法、化學方法、與生物方法等。 而本實驗則是使用 理方法的熱來使蛋白質變性，來了解變性前後能量上的差異，進而探討蛋白質結構之 熱穩定性。 實驗原理 A. 方法 將蛋白質密封至一鋁製的Cell 中，然後使用Differential Scanning Calorimetry （DSC ）對含蛋白質之緩衝溶液採取持續性的線性升溫動作，然後觀察蛋白質之 比 熱容量改變（heat capacity change ）之狀況。 B.儀器原理 A) 儀器構造與計算原理 DSC 顧名思義的是利用一持續性的線性加熱（scanning ）方式，然後觀 測樣品 與參考物的差異性（differential ）。當一吸放熱之現象產生時，即可得 到熱量變化，而此 變化是以溫度為參數的方程式，我們稱之為熱流（heat flux ） 變化。通常利用此儀器來觀 測Tg 、melting 、crystallization 、curing 、cure kinetics 、onset of oxidation、以及heat capacity 。 Fig 1 ）為 一爐體所構成，主要有兩端，一為樣品端，另一為參考端， 儀器的基本構造 （ 外圍則纏繞加熱 線圈可使爐體升溫。 115 國立中興大學物理系 生物物理實驗 95學年度 Fig1 左圖為 DSC 之示意圖。爐體內部有兩 端可放置樣品，一為參考，另一為樣品端， 外圍則有加熱器可對內部加溫，來使爐內 溫度增加。虛線所對其部分為兩個 thermal couple 。 此時同一個Cell 的溫度差可以代入熱歐姆定律中，左右能量差即可求得Cell 的熱流為何。（Fig 2 ） T − T T − T s fs r fr Qs ； Qr = R R s r Fig 2 右圖為溫度差異所 得到之圖形。其中Rs 與Rr 分