2011分光光度计性能的检查.pptVIP

哈尔滨医科大学;一、实验目的 二、实验原理 三、试剂与器材 四、仪器的使用方法 五、实验步骤 ;1、掌握T6新悦-可见分光光度计主要性能的检定方 法和仪器的使用。 2、熟悉仪器的主要性能和技术指标。 3、了解仪器的基本结构。;紫外－可见分光光度法（ultraviolet-visible spectro-photometry, UVS）是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。 Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。 A=εb c;结构示意图：光源→单色器→样品池→检测器→信号显示装置 一、主要部件 （一）光源：可见分光光度计→钨灯 λ=320-2500nm 紫外分光光度计→氢灯，氘灯λ=150-400nm （二）单色器：将光源连续光谱按波长顺序色散并选出所需单 色光。 （三）吸收池：普通玻璃和石英玻璃。 （四）检测器：光信号变成电信号（光电管、光电倍增管）。 （五）信号显示装置：将输出信号经处理转换成透光度或吸光 度再显示或记录下来。;1、试剂：氯化钴溶液2、6、10mg/ml。 2、器材：T6新悦－可见分光光度计 玻璃吸收池；100ml烧杯； 镜头纸；滤纸；一次性吸管;四、仪器的使用方法 1、开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成。 预热1h。 2、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入吸光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。 ;3、设置测量波长： 在测量界面下，按GOTO λ键 在数字 键盘上键入波长数值 按ENTER键 4、设置吸收池模式和个数： 按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。 （1）按上翻键，设置吸收池类型： 1CELL——固定池，只有一个吸收池可用于测量。 5CELL——五联池，最多有五个吸收池可用于测量。 8CELL——八联池，最多有八个吸收池可用于测量。 ;（2）按下翻键，设置吸收池个数。 例如：如果实验需要6个吸收池进行测量， 那么吸收池类型应设置为8CELL，吸收池个数设为6。 注意：1、设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳。 2、设置吸收池个数的正确操作是按下翻键进行选择，而非在数字键盘上键入。如键入2，钨灯将被关掉。 ;5、自动校零： 按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。 在1号吸收池中放入空白溶液，按ZERO 键进行空白校正。 注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正。 ;6、测量样品：从2号吸收池开始， 依次放入样品，按START键，仪器测量 全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。 读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值。 7、打印结果：在已连接打印机的情况下，按PRINT键打印数据。 8、结束测量：按SHIFT/RETURN键，从读数界面返回测量界面，关闭电源。 注意：关电源后，系统中存储的数据结果将丢失。 ; 测量全部完成后，切换到测量界面，然后关闭仪器电源。 用蒸馏水清洗吸收池，倒扣于滤纸上晾干；如果吸收池污染严重，冲洗后置于70％～80％的酒精中浸泡。 将用过的仪器、试剂等放回原位。;五、实验步骤 1、仪器外观检查 2、稳定度检测 3、波长准确度（校正）与波长重复性 4、线性误差检查 5、透光度重现性检定 6、杂散辐射率 7、吸收池的配套性检定;1、仪器外观检查 ;3、波长准确度（校正）与波长重复性： （1）波长准确度（校正） 系统自动检测内置镨钕玻璃片808.0nm的 特征波长，时间大约1min。 检测完成后，系统显示实测波长值。 Δλ=λ示-λ808 ＞1nm时，按enter键校正， Δλ=λ示-λ808＜1nm时，不需波长校正，按▼键，再按enter，系统返回系统应用界面。 ;（2）波长重现性检定 以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液(6mg/ml)在 510nm处的吸光度（英文缩写为A或ABS）。逐一作3次 测量，记录吸光度值。代入公式计算波长重复性,并绘制波长吸收曲线。;4、线性误差检查： 测量界面。 （1）设置波长键： λ=510nm （2）设置吸收池个数： （3）空白校正： （4）测量：将2、6、10mg/ml的CoCl2