浅谈基质效应课件.ppt

浅谈基质效应;基质效应产生的原因和影响 基质效应的确认方法 基质效应的消除;基质效应的产生原因;基质效应的产生原因;基质效应的产生原因;根本原因是什么？ 基质效应会产生哪些不好的影响 ;标准曲线法 柱后灌注法 监控法;样品配制方法：配制三种不同的标准曲线（每条标准曲线7个点，每一种配制方法五样本） 1、药物+内标：用流动相稀释到一定浓度 2、药物+内标：用含有5种不同来源的空白生物样品的流动相 稀释 3、正常配制的生物样品;评价方法： 通过比较3组标准曲线待测组分的绝对响应值、待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率，可以确定基质效应对定量的影响。;绝对响应值比较 第1组测定结果可评价色谱系统和检测器的性能以及整个系统的重现性。 第2组测定结果同第1组测定结果相比，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应的影响。 第3组测定结果，若待测组分响应值的相对标准偏差明显增加，表明存在基质效应和提取回收率因血浆来源不同而不同的共同影响。;绝对响应值比较 如果将第1组、第2组和第3组测得的相应的响应值分别用A、B、C表示，可按下列公式分别计算基质效应(ME)，提取回收率(RE)和方法效率(PE)： ME(％ )=B／A×100………… (1) RE(％)=C／B×100 …………(2) PE(％)=C／A×100=(ME×RE)／100………… (3) 公式(1)计算得到的ME为绝对基质效应。相对基质效应通过对不同来源样品间的B值进行比较获得。当ME值等于或接近100时，表明不存在基质效应的影响；当ME值大于100时，表明存在离子增强作用；当ME值小于100时，表明存在离子抑制作用。;待测组分与内标的响应值比值和标准曲线的斜率 Standard line slopes as a measure of a relative matrix effecting quantitative HPLC–MS bioanalysis The results of these studies indicated that the variability of standard line slopes in different lots of a bio fluid [precision of standard line slopes expressed as coefficient of variation, CV (%)] may serve as a good indicator of a relative matrix effect and, it is suggested, this precision value should not exceed 3–4% for the method to be considered reliable and free from the relative matrix effect liability.;另外，有学者建议使用低、中、高三浓度的质量控制样品（QC）来评价基质效应的大小；有人建议使用定量下限（LLOQ）水平的6个个体的基质来评价。;将空白生物样品的提取液和空白溶剂分别进样进行液质分析，同时利用注射泵将含相同浓度待测物的标准溶液通过色谱柱与质谱接口之间的三通注入到色谱柱流出液中。如果同空白溶剂的萃取离子图谱相比，空白提取液的萃取离子图谱的响应信号明显减弱或增强，则表明存在基质效应的影响。;柱后灌注法;样品配制：分别用液液萃取（正己烷-异丙醇）、固相萃取、沉淀蛋白（乙腈沉淀和高氯酸沉淀） 1、正常配制空白样品 2、用水代替血浆配制样品 3、流动相;液液萃取;液液萃取;由于基质效应是无法监测的，所以消除困难。如果能够用一种物质代表基质效应，那么我们就能够直观的看到基质的具体保留行为，从而分离基质与待测物，消除基质效应。;Systematic and comprehensive strategy for reducing matrix effects in LC/MS/MS analyses Erin Chambers ?, Diane M. Wagrowski-Diehl, Ziling Lu, Jeffrey R. Mazzeo;In our studies, we evaluate several sample preparation methods, including protein precipitation (PPT), liquid–liquid extraction (LLE), silica-based solid-phase extraction (SPE) and polymeric SPE. Because endogenou phosph