环糊精葡萄糖基转移酶的基因改造与高效表达.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（２）：１０５１１０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 环糊精葡萄糖基转移酶的基因改造与高效表达 夏亚穆　李晨晨 （青岛科技大学 化工学院　青岛　２６６０４２） 摘要　环糊精葡萄糖基转移酶（ＣＧＴａｓｅ，ＥＣ２．４．１．１９）是一种多功能酶，主要用于生产环糊精 （ＣＤ）、糖基化碳水化合物，同时在食品行业也有重要作用。为改善 ＣＧＴａｓｅ在这些方面的应用性 能，筛选出优势突变酶，异源表达、定点突变、固定化等技术被研究和应用，取得了实质性的进展。 综述了ＣＧＴａｓｅ基因高效异源表达策略，概述了基因改造ＣＧＴａｓｅ的研究进展，并且还总结了用于 改造ＣＧＴａｓｅ的其他手段，例如固定化酶、嵌合酶、化学添加剂等，以期为在相关ＣＧＴａｓｅ研究领域 开展研究提供参考。 关键词　环糊精葡萄糖基转移酶　环糊精　异源表达　定点突变　分子工程 中图分类号　Ｑ７８９ 　　环糊精葡萄糖基转移酶（ＣＧＴａｓｅ，ＥＣ２．４．１．１９）是 般低于５０Ｕ／ｍｌ等。随着对其作用机制、分子结构及 α淀粉酶家族的重要成员，能催化环化、耦合、歧化和 ３Ｄ结构的研究深入，人们已经发现 ５０多个不同 ［１］ ＣＧＴａｓｅ晶体结构，为分离获取具备特殊性质从而更好 水解这四种反应 。环化反应生产环糊精是其特征反 ［２］ 应，ＣＧＴａｓｅ催化淀粉的 糖苷键断裂，供体的一部分 地满足工业生产的ＣＧＴａｓｅ菌株提供基础 。研究人 α 被分离出来作为受体形成 ＣＤ。耦合反应是环化反应 员对 ＣＧＴａｓｅ的研究集中在筛选高效、高专一性的 的逆反应，ＣＤ环的 糖苷键断裂，得到的低聚麦芽糖 ＣＧＴａｓｅ，在此基础上进行分子改造、异源表达、固定化 α 转移到受体底物上。歧化反应是直链低聚麦芽糖的一 等，期望得到更适于工业应用的优势酶。本文介绍了 个 糖苷键断链，然后把它的一部分转移到受体底物 新发现的ＣＧＴａｓｅ及新性状和新用途，对 ＣＧＴａｓｅ基因 α 上。水解反应是水分子作为受体，催化底物水解，形成 高效表达与分子工程策略等相关研究进展进行综述， 低聚糖。在ＣＧＴａｓｅ的四种反应中，环化、耦合、歧化是 并结合现有资源与技术指出当前研究的不足，对 转糖基作用，活性较高；水解作用的活性通常较低，并 ＣＧＴａｓｅ未来的研究指出方向。 且控制ＣＧＴａｓｅ的水解活性将有利于环糊精的生产，工 １　新ＣＧＴａｓｅ的性质和应用 业生产中主要是利用ＣＧＴａｓｅ的转糖基作用。 　　环糊精因其独特的理化性质不仅用于食品行业， １．１　新ＣＧＴａｓｅ的性质 在医药、化妆品、环境保护等诸多领域也有着非常广泛 　　 自然界中产 ＣＧＴａｓｅ的微生物主要为 Ｂａｃｉｌｌｕｓ、 的应用，其工业化生产将具有重要意义。目前，世界上 Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ、 Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、 Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、 ［３］ 生产 ＣＤ的国家主要有匈牙利的 Ｃｙｃｌｏｌａｂ、法国的 Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ等 。不同来源的ＣＧＴａｓｅ，由于宿 Ｃｓｅｓｔａｒ、德国的 ＷａｃｋｅｒＢｉｏｃｈｅｍ以及 日本的 Ｅｎｓｕｉｋｏ 主的蛋白质合成、修饰和转运过程各自不同，其性质差 Ｓｕｇｅｒ，但是由于工业化制备环糊精的过程影响因素众