第三章不同品种山羊脂肪组织膻味相关基因的表达分析.doc

硕 士 学 位 论 文 题 目 不同品种山羊脂肪组织膻味相关基因的表达及膻味物质的研究 作 者 唐 璐 完成日期 2015 年 3 月 24 日 学 科 门 类 农 学 专 业 动物遗传育种与繁殖 研 究 方 向 动物遗传资源保护与利用 指 导 教 师 王永教授，江明锋教授 学院（系、部） 生命科学与技术学院 授予学位日期 年 月 日 The Study on Gene Expression of Goaty-flavor-Related Genes and Odor Compounds in Goats’ Adipose By TANG Lu A Thesis Submitted To Southwest University for Nationalities In Fulfillment of the Requirements For Master Degree College of Life Science and Technology Southwest University for Nationalities Chengdu, 610041, P.R.China 2015 特别说明 本论文由“十二五”国家科技支撑计划课题(No. 2012BAD13B06) 、四川省重大产业链项目二期(2011NZ0003)和四川省“十二五”畜禽育种攻关2011NZ0099-36）资助，是项目的部分研究内容。 本论文在“西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室”完成。 摘要 本文以简州大耳羊、成都麻羊和藏山羊为研究对象，利用实时荧光定量PCR技术和geNorm程序对脂肪组织（腹脂和背脂）中ACTB、ALAS1、EIF3K、HSP90、RPLP0、UXT六个候选内参基因进行了筛选评估，利用筛选结果对四个膻味脂肪酸相关候选基因FASN、HSL、LPL、PID1的mRNA表达水平进行均一化处理分析。同时，应用顶空固相微萃取技术和气质联用仪优化了山羊脂肪组织中风味挥发性物质的条件方法，并对三个山羊品种腹部脂肪中的挥发性风味物质进行了鉴定。最后，对膻味候选基因的mRNA表达水平与挥发性化合物之间的相关性做出了分析。取得如下研究结果： 1．内参基因的筛选结果表明：六个候选内参基因均可获得特异性扩增产物；经geNorm程序分析得出，在简州大耳羊、成都麻羊和藏山羊的脂肪组织中，选择EIF3K、RPLP0、ACTB、HSP90四个基因作为内参基因 2．通过对简州大耳羊、成都麻羊、藏山羊的腹脂和背脂中FASN、HSL、LPL、PID1四个目的基因进行mRNA表达水平的分析得出： （1）脂肪组织间表达差异结果表明：在简州大耳羊的腹脂和背脂之间，FASN基因的相对表达量存在显著差异（P0.05），而HSL、LPL、PID1基因的表达则无显著差异（P0.05）。在成都麻羊的腹脂和背脂之间，FASN基因的相对表达量存在显著差异（P0.05），而HSL、LPL、PID1基因的表达则无显著差异（P0.05）。在藏山羊的腹脂和背脂中，FASN、HSL、LPL、PID1四个目的基因的mRNA表达水平均无显著差异（P0.05），但四个基因在两种脂肪组织中均有较高的表达。 （2）山羊品种间表达量差异结果表明：对于FASN基因，简州大耳羊、成都麻羊分别与藏山羊的表达量之间存在极显著差异（P0.01）。对于HSL基因，在背脂中，简州大耳羊、成都麻羊分别与藏山羊之间存在显著差异（P0.05）。LPL基因在背脂中，简州大耳羊与藏山羊之间、成都麻羊与藏山羊之间的表达水平均达到显著差异（P0.05）。对于PID1基因而言，三个品种间均无显著差异（P0.05）。 （3）FASN/HSL的表达量水平分析结果表明：在简州大耳羊的腹脂和背脂间，FASN与HSL的比值存在显著差异（p0.05）。对于品种间的比较发现，腹脂中，成都麻羊与藏山羊之间 FASN/HSL差异极显著（P0.01）；背脂中，FASN/HSL在简州大耳羊与藏山羊之间、成都麻羊与藏山羊之间均存在极显著差异（P0.01）。 3．顶空固相微萃取条件优化的结果表明：采用65μm PDMS/DVB萃取纤维头（blue fiber）、萃取预热孵化温度/时间为120℃/90min基本上满足了对脂肪组织中挥发性化合物的测定实验要求。 4．通过SPME-GC-MS技术对简州大耳羊、成都麻羊和藏山羊腹脂中的挥发性化合物进行鉴定，分析得出： 共鉴定出78种有效的挥发性化合物，其中简州大耳羊55种，成都麻羊52种，藏山羊58种，包括烃类5种，醇类2种，醛类19种，酮类18