AFLP标记技术在青菜品种鉴定上的应用.pdfVIP

杭州农业科技 2008年第1期 AFLP标记技术在青菜品种鉴定上的应用 李红斌 王 宏 (杭州市农业科学研究院蔬菜研究所，浙江杭州 31I101) 摘 要 本文对lO个主栽青菜品种绘制AFLP指纹图谱，共筛选出的5对引物，扩增出多态性位点 454个，平均每对引物扩增位点90个，多态性位点占总扩增位点的比例为57．5％：5对引物对lO个 青菜品种的区分率均达100％。其中一对引物在329bp有一条明显的特异条带，可用于A兀P指纹 鉴定青菜品种“油冬儿”，为以后用分子辅助育种提供理论依据。 关键词 AFLP；青菜；油冬儿；品种鉴定 传统的青菜品种鉴定方法主要是对植株形态进 1．2 方法 行观察，但由于大部分青菜品种苗期相似，要到成株 1．2．1 基因组DNA的提取 每个品种取3O株，将 才开始表现品种的特性，所以对青菜品种鉴定往往 样品分为3份，lO株为一个重复，混合后提取DNA。 需要较长时间。近年来，随着DNA分子标记技术的 参照Murray与Thompson[2J介绍的方法提取DNA，在 逐渐成熟，在品种鉴定上应用也有很多报道[1l，而 UV一7504型紫外／可见分光光度计测定 DNA AFLP鉴定技术在青菜品种的研究尚未报道。杭州 OD260／OD280比值的大小，并通过 l％琼脂糖凝胶 市优良地方品种油冬儿是杭州地区主要的青菜品 检测DNA纯度。 种，由于长期缺乏管理，导致传统品种混杂，面临市 1．2．2 AFLP分析 根据北京鼎国生物技术有限责 场淘汰危机。本试验应用AFLP技术绘制了杭州主 任公司AFLP试剂盒进行基因组酶切、连接、预扩及 栽lO个青菜品种的DNA指纹图谱，主要用于鉴定 选扩，用ABI377测序仪收集条带生成胶图，然后进 青菜品种油冬儿，为地方名优蔬菜品种的保护提供 行AFLP多态性分析；所用内切酶为EcoR I和Mse I， 理论依据。 实验中所用接头、引物序列如下： EcoR I接头：5’一TCGTAGA GTACC一3’；5’ 1 槠料s方法 一 AA11’(；GTACGCAGTCTAC一3’ 1．1 材料 Mse I接头：5’一GACGATGAGrI℃C-3GAG一3’；5’ 供试青菜品种为杭州主栽品种，其名称和来源 一 TAC rCAGGAC I℃AT一3’ 见表l。 EcoR I 预扩引物序列E—A：5’一GA G— TACCAA I’I℃A一3’ 表1供试青菜品种及来源 Mse I预扩引物序列M—C：5’一GATGAGrI℃一 C I’GAGTAAC一3’ 选择性扩增引物为预扩引物3’端加两个碱基， 实验选用8个EcoR I引物和8个Mse I引物，其 EcoR I引物序列为E—AAC，E—AAG，E—ACA，E — A