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亚热带农业研究 第4卷第1期 Subtropical Agriculture Research 2008年2月 AFLP技术及其在植物和病原真菌研究中的应用 林剑伟，阙友雄，陈天生，许莉萍 (福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室，福建福州350002) 摘要：综述了AFLP分子标记技术的基本原理、方法及其在植物和病原真菌研究中的应用现状，并探讨了其中存在的一些 问题。 关键词：AFLP；cDNA．AFLP；植物；病原真菌 中图分类号：Q93，Q94，Q7 文献标识码：A 文章编号：1673-O925(2008)01-0067-06 AFLP technique and its application to the research of plant and fungus LIN Jian·wei，QUE You-xiong，CHEN Tian-sheng，XU Li-ping (Key Lab of Eco-physiology＆Genetics Improvement for Sugarcane。Ministry of Agriculture， Fujian Agriculture and Forestry University，Fuzhou，Fujian 350002，China) Abstract：The basic principle，manipulation methods of AFLP(amplified fragment l~sth polymorphism)technique and its applica- tion to the rese吡℃h of plant and fungus，were summarized，and some existing problems were also discussed． Key words：AFLP(amplified fragment length polymorphism)；cDNA-AFLP；plant；fungus 自从1953年Watson和Crick提出DNA双螺旋结构以来，核酸分子生物学技术发展迅速，并且得到了 广泛应用。随之，DNA分子标记技术产生并得到迅猛发展，应用于各个研究领域。首先出现了以分子杂 交为基础的DNA分子标记，即限制性片段长度多态性(restriction fragment polymorphism，RⅡ．P)…。它是 通过Sounthem杂交技术检测基因组总DNA多态性的共显性分子标记，其结果稳定、可靠，但操作繁琐，灵 敏度不高。自从1985年美国科学家Mullis发明了PCR技术以来，以PCR为基础的DNA分子标记相继出 现，如RAPD、SSR、AFIJP、SRAP、TRAP等。RAPD(random amplified polymorphism DNA)／2 J是利用1O bp左 右的随机引物，在不需要预知基因组DNA序列的情况下，对整个基因组DNA进行多态性扩增。但该技术 对实验要求较高，结果不稳定，重复性差。之后综合RFLP和RAPD 2种分子标记技术又发展了一种新的 技术——AFIJP(amplified fragment length polymorphism)技术，它克服了RFLP的操作繁琐、灵敏度不高和 RAPD的稳定性差、重复性不好的缺点，同时又兼具这两者的优点，是一种高效的分子标记技术，而且 AFLP标记可以转成特异性SCAR标记 ．4 J。目前该技术已经在遗传图谱构建、基因定位、种质资源鉴定、 遗传多样性研究、分子标记辅助育种、病原诊断以及流行病学等各个领域得到广泛应用。另外，在AFLP 技术的基础上发展起来的cDNA—AFLP技术 具有假阳性率低、操作方便等优点，适合于mRNA差异表达 的研究。 1 AFLP分子标记技术的原理和方法 AFLP分子标记技术是由荷兰科学家Zabeau和Vos于1992年发明的，并获得欧洲专利l6 ]。它是将 RFLP和RAPD技术相结合而发展起来的第3代分子标记技术，可靠性和灵敏度高，多态性丰富，结果稳定 可靠。在不必预知基因组DNA序列的情况下，利用2种限制性内切酶(通常采用Mse