大型真菌DNA提取方法的改进.docVIP

大型真菌DNA提取方法的改进 周玲玲 梁俊峰( （中国林业科学研究院热带林业研究所，广东 广州 510520） 摘要:大型真菌中的一些类群的子实体由于含胶质和多糖较多，对提取高质量的DNA及随后的分子生物学实验有很大影响。针对这一现象，对过去大型真菌的DNA提取方法进行了改进，提出一种实用、DNA提取方法。通过实验证明，此方法去除样品中胶质和多糖的效果明显，可有效获得高质的DNADNA；提取方法 AN IMPROVED PROTOCOL FOR EXTRACTION OF DNA FROM MACROFUNGI Zhou ling-ling Liang jun-feng* （Research Institute of Tropical Forestry Chinese Academy of Forestry, Guangdong Province, Guangzhou510520, China） Abstractome macrofungi contain colloids and polysaccharides, which have a negative effect on extraction of high-quality DNA and subsequent molecular biological experiments. In order to reduce the negative effect, a practical and efficient protocol for extraction of macrofungi DNA was developed. It showed that theprotocol could reduce colloids and polysaccharides of isolating DNA from the macrofungi effectively, which was beneficial for carrying out the subsequent molecular biological studies. Key words: macrofungi; DNA; isolating methods 大型真菌是真核生物界中一个重要类群，了解大型真菌对研究整个真核生物界具有巨大影响和深远意义。随着分子生物技术的发展和对大型真菌研究的深入，从分子水平上对其基因资源、遗传基础及系统分类进行研究逐渐成为大型真菌研究的一个重要方面。 获取高质量的总DNA是进行分子生物学研究的前提和基础，不少学者对不同类群真菌的DNA提取方法进行过研究，如丝状真菌、白腐真菌等[1～4][2～7]DNA，普遍存在胶状物质及多糖去除不彻底的缺陷，导致提取的DNA质量不高，进而在很大程度上影响了大型真菌分子生物学研究的后续工作。为了能够有效地获得高质量的DNA，笔者通过提取若干富含胶质或多糖的大型真菌干标本牛肝菌类（Boletoid）和红菇属（Russula）的DNA，对提取方法进行DNA的提取方法，为该类真菌的分子生物学研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 实验采用8种真菌材料，在野外收集新鲜实验材料，即时用硅胶干燥，将分子材料带回实验室进行DNA提取，具体菌株及其来源见表1。 表1 供试菌株及其来源 编号 种名 来源 1 红色红菇（Russula rosea） 广西省苍梧县木桑镇 2 葡酒红菇（R. vinosa） 云南省景洪市大渡岗镇 3 致密红菇（R. compacta） 云南省景东县哀牢山自然保护区 4 红菇（R.lepida） 云南省景东县哀牢山自然保护区 5 兄弟牛肝菌（Boletus fraternus） 海南省昌江县霸王岭自然保护区 6 黄粘牛肝菌（Suillus flavidus） 云南省丽江市象山 7 黄粉牛肝菌（Pulveroboletus ravenelii） 海南省乐东县尖峰岭自然保护区 8 大津粉孢牛肝菌（Tylopilus otsuensis） 海南省乐东县尖峰岭自然保护区 1.2 DNA提取 1.2.1 常规的CTAB法 有关大型真菌的DNA提取方法甚少报道，仅Xu等研究过大型真菌DNA的提取[4]，本文将其方法作为常规的CTAB法，具体的提取步骤参见该论文。 1.2.2 改进的二次CTAB法 (1) 取20～50 mg干净材料1.5 mL离心管中，离心管中预先加入少许石英砂和PVP。 (2) 用镊子夹住盛有材料的离心管管缘，将离心管液氮中冷却数秒迅速用塑料研磨杵研磨，使之呈细粉状。冷却时注意要将离心管口高于液氮表面，以防污染。(3) 在装有磨碎材料的离心管中加700 μL 在65℃预热的