创伤性休克时重要脏器一氧化氮合酶的变化及意义.docVIP

　　创伤性休克时重要脏器一氧化氮合酶的变化及意义 --摘　要　为了探讨创伤性休克时脏器一氧化氮合酶(NOS)的动态变化及NOS抑制剂、L-精氨酸对创伤性休克的治疗效果,复制了大鼠创伤性休克模型,检测创伤性休克后0#8226;5h、3h、5h心脏、肺脏、小肠、肝脏、脾脏中iNOS和cNOS的变化;另外在休克后静脉予氨基胍(AG)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、左旋精氨酸(L-Arg),检测大鼠脏器中iNOS和cNOS的变化,观察在给药后动物的生存时间和死亡率。结果表明,正常大鼠所有脏器均有cNOS表达,肝脏和肺脏还有少量iNOS分布。创伤性休克后0#8226;5h几乎所有脏器cNOS有不同程度的提高,而iNOS却无明显变化;休克后3h,脏器中cNOS开始下降,而iNOS开始上升,到休克后5h,iNOS大量合成,与对照组比较差异显著(P　　一氧化氮(NO)在休克的病理生理过程中发挥了重要作用,与休克后血管反应性下降、器官功能衰竭及死亡等密切相关[1]。创伤性休克属于低血容量性休克,不同于脓毒性休克及单纯性失血性休克[2]。以往的实验证明,创伤性休克后期复苏后NO显著增加[3]。本实验进一步研究创伤性休克时重要脏器各型一氧化氮合酶(NOS)的变化。 1　材料与方法 1#8226;1　材料　健康SD大鼠,体重280±20g,雌雄不拘,由第一军医大学实验动物中心提供。乌拉坦(广州化学试剂厂,分析纯);氯醛糖(瑞士Fluka公司);枸橼酸钠(上海化学试剂公司,分析纯);NOS检测试剂盒(南京建成生物制品工程研究所);左旋精氨酸(L-Arg)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)和氨基胍(AG)均由美国Sigma公司提供。Glison生理记录仪(美国Glison公司);血压换能器P23ID(美国Gould-Statham);DU640核酸蛋白分析仪(美国Beckman公司)。 1#8226;2　创伤性休克模型的制作　SD大鼠腹腔注射13#8226;3%乌拉坦-0#8226;5%氯醛糖6#8226;7ml/kg全身麻醉,右侧颈动脉、颈静脉插管,分别用以记录血压和输液复苏,用3#8226;8%枸橼酸钠抗凝。稳定10min,以2#8226;5kg铁轮自30cm高处自由落下,致大鼠两后肢上端骨折,平均动脉压(MAP)降至60mmHg即认为休克开始(15~20min内不休克者弃用)。断肢结扎止血,一侧股动脉立即插管放血,使血压降至40mmHg,通过抽、输血维持该血压1#8226;5h后予复苏。失血量为总血量的40%,回输抽的血液,以林格液补足失血量,再给总失血量1倍的林格液。拔管缝合,并缝合下肢创口。上述过程均无菌操作。 1#8226;3　动物分组和检测方法 1#8226;3#8226;1　创伤性休克时脏器NOS的变化　SD大鼠分为对照组(假手术组)、休克0#8226;5h组、休克3h组和休克5h组,每组各8只。对照组予颈动、静脉及一侧股动脉插管后处死,其他组大鼠在休克后相应时间处死,立即取肝脏、脾脏、肺脏、小肠、心脏,按1∶9比例加入匀浆缓冲液,冰浴下匀浆,充分研磨后,吸取标本,4℃14 000g离心30min,然后14 000g4℃超滤离心1h,滤液在-80℃保存备用。取50μl测蛋白含量,另取100μl测NOS活性,检测步骤严格按照试剂盒说明书操作,在530nm波长下测定吸光度,根据吸光度的大小计算出NOS活力。每毫克组织蛋白每分钟生成1nmol NO为一个NOS酶活力单位。 1#8226;3#8226;2　NOS抑制剂、L-精氨酸对创伤性休克大鼠存活率的影响　SD大鼠复制创伤性休克模型,分为对照组、AG组(100mg/kg)、L-NAME组(10mg/kg)、L-Arg组(100mg/kg),每组各10只。对照组予林格液复苏。其他实验组在予林格氏液复苏的同时经静脉回输各药液,药液量计入复苏液体总量。复苏、清创完毕放回笼内观察。计算24h存活率。 1#8226;3#8226;3　NOS抑制剂、L-精氨酸对创伤性休克大鼠脏器NOS的影响　分组及处理同1#8226;3#8226;2,每组各8只,在休克后5h处死,取脏器测NOS活性,脏器及检测步骤同1#8226;3#8226;1。 1#8226;4　统计学处理　应用SPSS 11#8226;0统计软件处理,行t检验、方差分析,生存率行χ2检验。 2　结　果 2#8226;1　创伤性休克时脏器NOS的变化　对照组脏器中cNOS水平为肝脏5#8226;27±0#8226;16、脾脏6#8226;23±0#8226;26、小肠5#8226;53±0#8226;46、肺脏3#8226;62±0#8226;35、心脏5#8226;24±0#8226;32,肝脏、肺脏还可检测到少量iNOS(肝脏2#8226