盐芥TsTRX基因的分子克隆和在盐胁迫条件下的差异表达特性分析.pdfVIP

盐芥TsTRX基因的分子克隆及在盐胁迫 条件下的差异表达性分析 摘 要 氧化胁迫是普遍发生于植物胁迫应答过程中的生理现象，植物在遭受盐碱、干 旱、重金属、辐射、低温等多种胁迫时常常会发生次生性氧化胁迫 (伤害)。氧化 胁迫会改变植物体内稳定的氧化还原内环境，影响植物的正常代谢、生长过程、和 植物的生存。大量研究表明，植物对氧化还原内环境的调节能力以及植物的抗氧化 能力与植物的胁迫耐受力密切相关。因此，研究植物氧化性伤害的产生和应答机制 对了解植物胁迫状态下的代谢变化和代谢调节，揭示植物的耐逆机理，并最终为培 育理想的抗盐碱、抗千早耐逆作物具有重要的理论和实践意义。 TsTRX基因编码的硫氧还蛋白是一类广泛存于原核生物和真核生物的小分子量 蛋白质(其分子量约为12Kda)。该蛋白质中含有保守的一CP(G)PC-氨基酸活性基序， 该基序中的两个半胧氨酸残基可通过筑基/二硫键的转换实现其氧化还原状态的变 化和电子/氢的传递，对细胞中与氧化还原相关的多种生理过程的调节起重要作用。 通过同许多酶类、蛋白类、细胞内活性因子相藕连，TRX能对光合作用、DNA复制、 基因转录、细胞凋亡和生长、噬菌体组装、蛋白质的还原和修复信号传导等生理过 程产生影响和调节。在高等植物中，存在两个与硫氧还蛋白密切相关的硫氧还蛋白 系统:一个是位于叶绿体中的铁氧还蛋白一硫氧还蛋白系统，该系统中含有两类核基 因编码的硫氧还蛋白即f一型TRX和m一型TRX。它们能选择性的还原特异底物中的的 二硫键，激活光合酶类。另一个是NADP(H卜硫氧还蛋白系统，该系统是由h-型的硫 氧还蛋白、NADP(H)、和依赖于NADP(H)的硫氧还蛋白还原酶 (一种黄素蛋白)组成。 TRX同硫氧还蛋白还原酶、还原型烟酞胺腺41吟二核昔酸 (NADPH)或还原型铁氧还 蛋白组成细胞内的硫氧还蛋白氧化还原系统，对细胞内的氧化还原状态、细胞氧化 还原内环境、许多细胞代谢途径和信号传导通路进行调节。 本实验从200mmol.LNaCl处理的小盐芥地上部分构建的XZap-cDNA文库中克 隆了编码硫氧还蛋白的基因序列。通过对其序列特征、基因结构和在盐胁迫下的表 达特征分析得知TsTRX全长序列为663bp。其5端的UTR含有37个碱基，其3 UTR含有272个碱基，该序列中含有一个编码118个氨基酸的开放阅读框。Southern 杂交显示该基因在小盐芥基因组中是单拷贝的。Northen分析表明小盐芥在不同盐 浓度和不同盐处理时间下的表达量明显高于对照:200mmol.L-NaCl处理盐芥随时间 的延长TsTRX基因在盐芥中的表达量会增加，48hr达到最高。该基因的表达还表现 出地下部分 (根)和地上部分 (茎、叶)的组织差异。结合实验结果以及用 200mmol.L-NaCl处理的小盐芥地上部分构建的XZap-cDNA文库中得到的编码硫氧 还蛋白的cDNA序列的相关资料推测:TsTR,t基因可能在保护盐芥免受因胁迫引起的 氧化损伤中起作用。 关键词:小盐芥，硫氧还蛋白，基因克隆，基因表达，盐胁迫 分类号:Q78 CloningandDifferentialGeneExpressionofTsTRXinThe lungiellasalsugelneainResponsetoSaltStress Abstract Oxidativestress,ancommonsecondlystressoccurringaftermanykindofbiotic orabioticstressessuchassaltstress,drought,heavymetal,radiation,low temperature,microbicinfection,canchangetheplantinternalredoxenvironment andsubsequentlydisturbitsgrowthprocesses,metablismandexistence.Thestability ofplantinternalredoxenvironmentandplanttolerancetostressesarecloselyrelated withamoreefficientantioxidantandredoxregulatatorysystem.