红树植物木榄轴胰α-淀粉酶抑制剂活性成分的筛选.pdfVIP

红树植物木榄胚轴胰仅．淀粉酶抑制剂 活性成分的筛选 专业名称：生物化学与分子生物学 申请人： 刘英 指导教师： 赵丰丽教授 论父答辩委员会 主席：蕴蠹暨 。 V ，， 瓤：么溥牡 查星墓 虚垒色 玩耙 红树植物木榄胚轴胰a姥粉酶抑制剂活性成分的筛选 作者：刘英 指导老师：赵丰丽 年级：2012级 学科专业：生物化学与分子生物学 研究方向：酶与蛋白质化学 摘要 木榄(Bruguiera 种子在还没有离开母树的果实中就开始萌芽，并生长发育成绿色的棒状胚轴。木榄是一 种很有价值的海洋药用植物，具有清热解毒、止泻、收敛、止血及截疟等多种药理功 效，民间用于治疗发烧、腹泻、止血、消除咽喉肿痛及对抗疟原虫等。木榄胚轴在我国 西南沿海民间具有悠久的药用历史，在民间有将木榄胚轴捣碎，水煮口服，作为治疗腹 泻的收敛剂，在海南琼山市民间还利用木榄胚轴来治糖尿病。国内外研究证明红树植物 中含有大量用于治疗人类疾病的先导化合物，是一种值得开发利用的珍贵资源。 洳淀粉酶抑制剂属于糖苷水解酶抑制剂中的一种，它能有效地抑制肠道内唾液及胰 淀粉酶的活性，阻碍食物中碳水化合物的水解和消化，减少糖分的摄取，降低血糖和血 脂含量水平。临床上用于防治糖尿病、高血糖、高血脂等病症。 本课题以从广西北海市山口国家级红树林生态自然保护区采集的木榄胚轴为实验材 料，对木榄胚轴中的叶淀粉酶抑制齐lj活性成分进行提取分离、纯化，采用体外m淀粉酶 抑制剂筛选模型和HePG2细胞模型对活性成分进行筛选。 研究内如如下： l、木榄胚轴中胰叶淀粉酶抑制剂活性成分提取溶剂的筛选 为了大量得到木榄胚轴中0【．淀粉酶抑制剂的活性成分，选取石油醚、95％的乙醇和水 作为提取剂，用超声波辅助提取三次，合并提取液，最后用平板打洞法、平板滤纸片法 和Bernfeld法测定这三种提取溶剂提取的浸膏在体外对洳淀粉酶、胰甜淀粉酶和唾液淀 粉酶的抑制作用。结果表明：三种提取液对淀粉酶的抑制率：乙醇提取液水提液石 油醚提取液。当乙醇提取液相当于原料重0．259时对胰洳淀粉酶、a．淀粉酶、唾液淀酶的 抑制率分别为59．29％、57．52％、55．37％，都表现出较强的抑制作用。 2、木榄胚轴中胰0【．淀粉酶抑制剂活性部位的筛选 采用超声波辅助提取法，用筛选出的70％的乙醇作为提取溶剂进行提取，料液比为 液一液萃取法，用几种有机溶剂对提取液进行分级萃取，回收几种溶剂，获得石油醚相、 氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相和母液6个部分。分别采用打洞法和Bernfeld法测 定6个部位对洳淀粉酶的抑制作用。 结果表明：这6个部位对酶的抑制率大小为，母液正丁醇相水相乙酸乙酯相氯 仿相石油醚相。当阳性对照阿卡波糖为0．25mg时对胰0【．淀粉酶的抑制率为52．34％；母 液和正丁醇相当于原料重0．259时对胰伽淀粉酶的抑制率分别为62．95％、54．84％。在各 相中，正丁醇相最大，并且正丁醇相对胰m淀粉酶的抑制率大于阳性对照对胰m淀粉酶 的抑制率，表明正丁醇相为有效相，选作为下一步分离纯化的部位。 打洞法和Bernfeld法的结果是一致的，都表明木榄胚轴具有胰洳淀粉酶抑制剂的活 性成分，其活性成分主要在正丁醇萃取相中。 3、胰洳淀粉酶抑制剂的分离和纯化 树脂对正丁醇萃取相物质的吸附性和解吸性的效果，结果表明：AB．8型大孔吸附树脂对萃 取得到的正丁醇相粗提物具有较好吸附和分离性能。 选取AB．8大孔吸附树脂分离正丁醇萃取物，洗脱剂为水和乙醇进行梯度洗脱。当洗 脱剂乙醇的浓度为70％时洗脱得到的组分抑制率最高，其用量相当原料重0．1259时，对 胰融淀粉酶的抑制率为66．32％。 对70％洗脱得到的浸膏采用硅胶柱层析迸一步分离纯化。首先采用TCL法确定洗脱 系统