一种简易稳定的乳小鼠脑微血管内皮细胞原代培养方法.pdfVIP

第 41卷第 6期第 731页 华 中科技大学学报 (医学版) V0．【41 NO．6 P．731 2012年 12月 ActaM edUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2012 一 种简易稳定的乳小鼠脑微血管内皮 细胞原代培养方法 熊永洁， 尹 波， 甘 莉 ， 王 倩 ， 张苏明△ 华 中科技大学同济医学院附属 同济医院神经内科 ，武汉 430030 摘要：目的 寻找一种简单并稳定的原代小鼠脑微血管内皮细胞的培养方法。方法 采用两次酶消化法及 4℃梯 度离心法获得细胞 ，光镜和电镜下观察细胞形态 ，用检测Ⅷ因子相关抗原等方法鉴定细胞 。结果 光镜下细胞呈多角形 或短梭形 ，岛屿样聚集 ，随细胞生长及不断融合而出现 “漩涡状 ”、“铺路石”样排列 。电镜下观察可见紧密连接结构 。Ⅷ 因子相关抗原免疫荧光染色阳性 。结论 上述方法可获得纯度较高的小 鼠脑微血管 内皮细胞 ，为其原代培养提供 了一 种经济、简易、重复性好的操作方法，也为进一步的生理、生化、药理及体外血脑屏障或共培养等方面的研究提供了材料 来源 。 关键词：小鼠； 脑微血管内皮细胞； 原代培养 中图分类号：R329．51 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2Ol2．06．020 A SimpleandSteadyM ethodforPrimaryCultureofNewbornM ouse CerebralM icrovascularEndothelialCells XiongYongJie，YinBo，GanLietal DepartmentofNeurology，TongJiHospital，TongJiMedicalCollege，Huazhong UniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective Tofindasimpleandsteadymethodforprimarycultureofcerebralmicrovaseularendothelia1cells (CMECs)．Methods Thecerebra1corticesof1 to3-daynewborn C57miceweredissectedand themeningeswereremoved carefully。followedbydigestionwithtwokindsofenzymesandcentrifugationat4℃．TheCMECswereharvestedandobserved undertheinvertedphasecontrastmicroscopyandthetransmissionelectron microscopy(TEM)．Thegrowth curvewasdrawn throughMTT assayandfactorⅧ associated antigenwasdetected by using immunofluorescenceanalysistocharacterize CMECs．Results Afterprimaryculturefor24h。thecellsappeared “polygon—shaped”or “shortspindle—shaped”andclustered 1ikeislands．Asthecellsgrew ，theyformed confluentmonolayersdemonstrating “swirl”or “cobblestone”morphology．The structureoftightiunctionswasobservedundertheTEM andtheimmunofluorescencestainingrevealedthatthecellswereposi—