HPCE技术在中药指纹图谱研究应用进展.docVIP

HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用现状 摘 要:HPCE技术是近几年来发展较快的中药指纹图谱研究方法之一，通过概括其在指纹图谱上的应用现状，分别从样品提取、电泳条件、参照物等方面做以比较，为HPCE技术在中药指纹图谱研究方法中提供参考。 关键词：中药；高效毛细管电泳；指纹图谱；样品提取 引言 中药指纹图谱它具有系统性、特征性和稳定性的特点，是一种综合的、宏观的和可量化的鉴别手段，用以对中药材和中成药进行鉴别真伪，评价原料药材、半成品和成品质量的均一性和稳定性。目前，用于中药指纹图谱研究的方法分为色谱法和光谱法两类，以色谱法居多，其中又以HPLC最常用。但HPLC进行中药成分分析常遇到以下一些问题：(1)中药成分复杂，色谱柱易受污染，柱寿命短，且难以再生； (2)色谱柱上沉积的污染物，经常以杂质峰的形式出现； (3)分析运行成本高；(4)对于含极性成分较多的中药，其指纹的特征性不强。 HPCE技术是近几年来发展较快的中药指纹图谱研究方法之一，它刚好可以弥补以上缺点，虽然该技术的应用没有HPLC广泛，但它具有许多潜在的优势： (1)它具有柱效高、快速、进样体积小等特点；(2) 抗污染能力强，前处理简单，甚至于不需要前处理；(3)分析运行成本低； (4)水溶性样品的指纹特征性强，如中药汤剂、注射剂的分析等； (5)是应用面广。 HPCE除可分析小分子酸、碱、盐及中性分子外，还可分析生物大分子(核酸、多肽和蛋白质等)及手性分子等。因此，HPCE法可以完成中药指纹图谱研究的诸多课题。本文就已有的HPCE技术在中药指纹图谱研究的应用方法上作以下总结。 1 样品的提取 1.1 提取方式 (1)超声法 以醇或水为提取溶剂超声提取。 (2)回流法 该法多应用于植物药，尤其是多糖类成分的样品提取。其中，丹参多糖的提取兼用了超声和回流两种方法。多糖除蛋白的方法中，狗脊多糖和榧子多糖样品采用的是85%乙醇、无水乙醇和丙酮除蛋白。 (3)提取液法 该法主要是针对样品蛋白类成分的提取，专属性较强，为3种蛋白提取液，Tris-甘氨酸蛋白提取液：Tris 016g，甘氨酸2188g，加蒸馏水溶解至1000mL。碱性蛋白提取液：Tris-Hcl 011mol/L，011%抗坏血酸，巯基乙醇10mmol/L，pH810。酸性蛋白提取液:柠檬酸80mmol/L，Na2HPO432mmol/L，抗坏血酸5mmol/L，巯基乙醇10mmol/L，pH218。其中，可采用酸性蛋白提取液提取了参照物吴茱萸碱[1]。此外，蛋白类成分也有其他的提取方法，如蒙古黄芪多肽[2]：4e条件下浸泡提取并用硫酸铵沉淀。太子参中环肽Pseudostellarin B[3]：以甲醇为溶剂，超声辅助提取。以上所述的3种提取方式，不难看出超声提取法的应用更为广泛，考察不同提取方法对提取效率的影响，发现超声法与回流法提取效率相当，但回流法操作复杂，且加热过程中可能会引起药物组分的变化，而超声法简便省时，因而选用超声法进行提取更可行。 1.2 提取溶剂 一般为水、甲醇、乙醇等极性大的溶剂，其加入体积及浓度需要具体的实验考察。 1.3 提取时间 超声法的提取时间通常较短，一般在30~90min。而回流法的提取时间较长，大约在115~215h左右，索式回流提取[14]时间5h，回流加热前药材大多需要浸泡以便提取更加充分。 2 电泳条件的选择 通常电泳条件主要包括:毛细管规格、背景电解质种类与浓度、电压、柱温、进样方式、检测器等。其中背景电解质的选择尤其重要，主要是缓冲盐的种类、缓冲溶液的浓度及pH等。分述如下。 2.1 毛细管规格 常用内径50Lm或75Lm的石英毛细管，有效长度一般在40~60cm左右，总长度约50~67cm。 2.2 背景电解质 电解质的种类、浓度及pH对分离的影响较大，因为它直接影响电渗淌度，通常在实验当中要对其进行至少5个水平的实验考察。 (1)电解质的种类 一般为磷酸盐或硼酸盐的缓冲溶液，也有硼酸盐和磷酸盐混合体系，也有采用了1mmol/L Tris-10mmol/LH3BO3-015%四乙烯五胺-01025mmoL/LCTAB体系为缓冲体系[4]。为改善电泳峰的峰形及分离情况，有时会在缓冲溶液中加入有机改性剂。 (2)电解质的pH值 在pH9的硼砂缓冲液中电渗速度约为2mm /s，而在pH3的背景电解质中电渗速度约减小1个数量级。因此，背景电解质的pH值通常要大于7。当然有时在分析时会用酸性电解质，如对海马类药材蛋白质的分析就可用pH3.5的缓冲液[5]。 2.3 电压 范围在10KV~30KV。 2.4 进样方式 压力进样、重力进样、虹吸进样和电动进样。 2.5 检测器 一般是紫外检测器，分为可调波长检测器(