第二章发酵过程的工艺控制-1.pptVIP

2.1 概 述 一. 发酵体系的主要特征 1. 细胞内部结构和代谢反应的复杂性 2. 细胞所处环境的复杂性 3. 过程系统状态的时变性及参数的多样性和复杂性 影响因素多，有的因素未知，主要影响因素变化。 发酵水平主要取决于： 生产菌种的特性； 对工艺条件的控制（适合程度）； 必须了解： ● 菌体的生理代谢规律 ● 工艺条件对发酵过程的影响及其控制 ● 发酵过程的有关变化规律 常规发酵的工艺控制参数： 温度、pH、搅拌转速与功率、空气流量、罐 压、液位、补料速率及补料量等。 二. 发酵过程的参数检测 1.直接状态参数 ● 指能直接反映发酵过程中微生物生理代谢状况 的参数 ● 包括：pH、DO、溶解CO2、尾气O2、尾气 CO2 、黏度、基质和产物浓度、菌体浓度 （OD、DCW、湿重）等 ● 参数的检测 a 在线检测 各种传感器： pH电极、 DO电极、温度电极、液位电极、泡沫电极 尾气分析仪：测尾气O2和CO2含量 b 离线检测 分光光度计、pH 计、温度计、气相色谱（GC)、液相色谱（HPLC)、色质连用（GC-MS)等 2.间接状态参数 ● 指利用直接状态参数计算求得的参数 ● 包括：比生长速率μ、摄氧率OUR、 CO2释放率 CER、呼吸商RQ、氧的得率系数YX/O 、氧体积传 质系数KLa、基质比消耗速率QS、产物比生成速 率Qp等 综合各种状态参数，获得代谢过程的各种信息， 从而对发酵过程做出相应的调整和控制，以获得最经 济的发酵生产。 三. 发酵过程的代谢调控和优化 1. 代谢调控 以代谢（流）的调节最重要 ● 调节酶的合成量，称为“粗调” ● 调节酶的催化活性，称为“细调” 代谢工程 工艺控制和过程优化的实质，就是利用各种方法 和手段，使细胞的外部和内部环境最适合基质和能量 流向产物合成的生物途径，以获得最大的产量。 2. 发酵过程优化的一般步骤 ●确定反映发酵过程的各种理化参数及其检测方法 ●研究这些参数的变化对发酵过程的影响及其机制，获得最佳的范围和最适的水平 ●建立数学模型定量描述个参数间随时间的变化关系，为过程优化控制提供依据 ●通过计算机实施在线自动检测和控制，验证各种控制模型的可行性及其适用范围，实现发酵过程的最优控制 2.2 基质浓度对发酵的影响及其控制 先进的培养基组成是充分支持高产、稳产和经 济的发酵过程的关键因素之一。 一. 基质种类 一般包括： 碳源、氮源和无机盐 前体 二. 基质（原料）的质量 随产地和生产工艺而异 须保证稳定的原料质量 尤其对有机碳源和氮源，经多次实验而定 三. 基质浓度对发酵的影响 每一种基质都有一个适宜的浓度范围 ● 基质浓度太低 影响细胞的生长，不能保证足够量的菌体进行生产； 延长发酵时间，降低生产效率 ● 基质浓度太高 菌体生长太旺盛，发酵液黏度很大，KLa很小，DO很低，影响发酵正常进行； 影响产物形成： 如酵母利用葡萄糖进行培养，葡萄糖浓度太高， 将进行无氧发酵，产生乙醇，即为crabtree效应 又如葡萄糖氧化酶（GOD)发酵中： ◆ 低浓度下：诱导作用 ◆ 高浓度下：分解代谢物阻遏作用 浓度由8%→6%，酶活提高26% 以铵盐为氮源发酵： NH4+浓度过高，产生铵离子效应， 影响生长和合成 ● 基质浓度的控制 ◆ 初始培养基中：基质浓度适宜（由实验而定） ◆ 发酵过程：通过补料操作来控制基质浓度 应根据菌体特性、工艺条件要求和发酵过程中代谢的具体情况，确定补料方式、速率和补料量。 2.3 灭菌情况 灭菌温度高，时间长，对培养基破坏作用越大，影响菌体生长和产物合成。 如葡萄糖氧化酶（GOD)发酵中，灭菌温度比灭菌时间对产酶的影响更大。