钙网织蛋白在胃癌细胞株中的表达及意义.pdfVIP

· 2734 · 广东医学 2012年9月 第33卷第 18期 GuangdongMedicalJournalSep．2012，Vo1．33，No．18 钙网织蛋 白在 胃癌细胞株 中的表达及意义 黄红丽，沈波，杜艳蕾，聂玉强 广州医学院附属市一人民医院消化内科、广州市消化病重点实验室(510180) 【摘要】 目的 观察钙网织蛋白(calreticulin，CRT)在不同分化的胃癌细胞株中的表达水平，评价其在 胃癌 发生发展 中的作用。方法 正常胃黏膜上皮细胞株 GES一1及 3种 胃癌细胞株 (MKN28、SGC一7901、BGC一823) 培养于含胎牛血清的RPMI1640培养液中，采用实时荧光定量PCR测定上述4种细胞株CRTmRNA水平，结合细 胞免疫荧光和激光扫描共聚焦显微镜技术检测CRT蛋白水平。结果 CRTmRNA在4种细胞系均有表达，表达 强度依次为GES一1MKN28SGC一7901BGC一823(P0．05)；细胞免疫荧光染色显示CRT蛋白主要表达在 细胞浆中，在4种细胞系的表达变化趋势与mRNA一致。结论 CRT基因在 胃癌细胞株 中呈低表达状态，其表达 水平与胃癌的恶性程度有一定的关系，说明CRT是一项有潜在价值的肿瘤相关标志物。 【关键词】 胃癌；钙网织蛋白；基因；蛋白 胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一，目前 胃癌的发 5一GCACTYGGATCCACCCAGAA一3(上游 )和 5 一 生、发展及浸润转移机制尚未完全阐明。钙网织蛋 白 GAAGTTGTcAAAGATGGTGccAGA一3 (下游)，扩增 (ealretieulin，CRT)是内质网和肌浆网中主要的ca 结 片段 为 121bp；GAPDH，5 一GCACCGTCAAGGCT． 合蛋白，是热休克蛋白家族成员之一，与多种肿瘤的生 GAGAAC一3 (上游)和 5 一TGGTGAAGACGCCAGTG． 长和转移密切相关，但 目前国内外欠缺有关CRT表达与 GA+一3(下游)，扩增片段为 138bp。用DNA纯化试剂 胃癌关系的研究报道。2010年9月至2011年 10月，本 盒 (美国Promega公司)纯化PCR产物，将纯化产物用 研究采用实时荧光定量 PCR及细胞免疫荧光结合激光 紫外分光光度计定量，以100ng为初始浓度进行 10倍 扫描共聚焦显微镜技术检测 CRT基因在 胃癌细胞株的 稀释得到6个不同浓度的标准品。在荧光定量 PCR 表达情况 ，探讨其与胃癌发生、发展的关系。 仪 (MJResearch，DNAEngineOpticon 2System)上同 1 材料与方法 时进行标准品及样品的内参基因和 目的基因的扩增， 25 L反应体系：Platinum~ SYBR~ GreenqPCRSu— 1．1 细胞株和细胞培养 高分化 胃腺癌细胞株 perMix—UDG(美国Invitrogen公司)12．5IxL，上下游引 MKN28购 自上海市消化疾病研究所 ，正常 胃黏膜上皮 物各0．5iLL，eDNA0．5x／L，DEPC水 11txL，反应条件： 细胞株 GES一1、中分化胃腺癌细胞株 SGC一7901、低 先在 5O℃ UDG孵育 2min，95℃预变性 2min，然后 分化 胃腺癌细胞株 BGC一823购 自北京中科院细胞 95℃变性 15S，60oC退火延伸30S，共40个循环。根据 库。4株细胞均置于 RPMI1640培养基 ，补充 10％胎 标准曲线 ，实时定量PCR仪直接计算出每一样品各基 牛血清、100U／mL青霉素和链霉素，在37℃和5％CO 因的表达