雷帕霉素对血管内皮细胞凋亡及增殖、迁移、成血管能力的影响.pdfVIP

实用医学杂志 2011年第 27卷第 1O期 雷帕霉素对血管 内皮细胞凋亡及增殖 、迁移、 成血管能力 的影响 叶盛 张怀勤 林 以诺 黄伟剑 张艳丽 邵小琳 摘要 目的：探讨雷帕霉素 (rapamicin)对 内皮细胞凋亡及增殖、迁移、成血管能力的影响。方法：培养脐 静脉 内皮细胞并分组，将浓度为 O、1、10、100ng／ml的rapamycin与 内皮细胞作用 24h，DAPI染色观察凋亡 细胞核形态变化 ，CCK8法检测 内皮细胞的增殖能力，transwell小室检测迁移能力，并在倒置显微镜下检测细 胞 的成血管能力。结果：10、100ng／m[rapamycin能明显抑制 内皮细胞增殖能力(P0．01)。同时 rapamycin (1～100ng／mL)能抑制 内皮细胞 的迁移能力 (尸0．01)．rapamycin处理组和对照组相 比，DAPI染色可见更 显著的细胞凋亡形态学改变。100ng／mLrapamyein作用组与对照组相 比，能明显降低细胞成血管能力 (P 0．01) 结论 ：rapamycin可以诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖、迁移和成血管能力。 关键词 细胞凋亡 ： 雷帕霉素 ： 内皮细胞 ； 细胞增殖 冠心病是严重危害人类健康的常见疾病。近年 含 10％胎牛血清的RPMI1640培养基中，在 5％ 来经皮腔 内冠状动脉介入治疗广泛用于冠心病 的 CO，，37cC培养箱内孵育。 非药物治疗 ，但较高的再狭窄率严重影响手术疗 1．2．2 实验分组 ：分为 4组 ：(1)正常对照组 ：加 效 。而以雷帕霉素 (rapamycin)洗脱支架为代表 的药 入 配制 rapamycin的溶 剂 (0．O1％ DMSO)；(2) 物涂层支架能抑制平滑肌细胞迁移、增殖 ，从而抑 rapamycin各浓度干预组(共 3组)：分别用含 1、10、 制血管 内膜增生 ，减少支架 内再狭窄和临床不 良事 100ng／mLrapamycin的培养基与 内皮细胞共同孵 件发生率．使冠心病患者获益。血管内皮是血管壁 育24h。 与循环中血液及其他物质的屏障，其损伤及功能紊 1．2．3 DAPI观察细胞凋亡形态学变化 消化贴壁 乱与多种疾病的发生密切相关。研究发现l1，一些 细胞，将 3×104个细胞重悬于 300 培养液 ，接 雷帕霉素洗脱支架植入术后的患者出现一定程度 种到置于 6孔培养板的2cm ×2em的盖玻片上 ． 的冠脉内皮功能不全、再内皮化延迟 ，但其机制尚 置孵箱 2h细胞贴壁后加入 1mL培养液 ，随机将 不清楚。本研究 旨在观察 rapamycin对 内皮细胞凋 玻片分为对照组和 100ng／mLrapamyein组，每组 3 亡及增殖、迁移、成血管能力的影响，从而进一步探 片，培养 24h后 ，按 DAPI染色液说明书对细胞染 讨其损伤 内皮功能的机制 。 色并于激光共聚焦显微镜下观察 DAPI染色细胞 1 材料与方法 核形态 。 1．1 材料和试剂 胎牛血清 、0．05％浓度胰酶及 1．2．4 细胞增殖能力检测 各组细胞培养 24h RPMI1640培养基 、PBS、Hanks液购 自Gibco，雷帕 后 ，消化贴壁细胞 ，加入 1mL培养液重悬后计数 ． 霉素购 自福建科瑞药物有限公司、CCK一8细胞计数 以5000个 ／孔接种到96孔板，培养 24h后更换培 试剂盒购 自日本株式会社 同仁化学研究所 、 养液，每孔加入 10 LCCK．8试剂 ，于 37℃孵育 4 Transwell小室购 自Coming公司 ，Matrigel胶购 自 h，酶标仪 450nm下读取吸光度 OD值。 BD公司。 1．2