人乳头瘤病毒中和抗体检测方法的研究进展(期刊).pdf

维普资讯 ‘ 632· 中国生物制品学杂志2008年 7月第 21卷第 7期 ChinJBiologicalsJulv2008。VoI．21No7 ． 中国图书分类号11373113923·3 文献标识码A 文章编号1004-5503{2008)07-0632．06 【综述 】 人乳头瘤病毒中和抗体检测方法的研究进展 吴雪伶 王佑春 【摘要 】 人乳头瘤病毒疫苗已成为预防宫颈癌的最根本手段，而疫苗成功的关键是诱导有效的体液免疫，产生具有保护作 用的中和抗体。本文就 目前几种中和试验方法的原理及其优缺点进行综述。 【关键词】 人乳头瘤病毒；中和抗体；检测 宫颈癌是危害女性健康的第二大恶性肿瘤，而 物乳头瘤病毒中和试验模型建立较早，为疫苗的评 人乳头瘤病毒 (Humanpapillomavirus，HPV)的持续 价及中和抗体的检测提供了重要的参考，也为HPV 性感染是引发宫颈癌的最主要因素，因此，预防HPV 中和试验的建立奠定了基础 。 的感染是减少或控制宫颈癌的最主要手段之一。目 前国际上已有两家企业研制出了HPV预防性疫苗， 2．裸 鼠异源组织移植模型 我国也有部分企业在研制该类疫苗。而疫苗成功的 评价疫苗免疫效果不能直接用人体进行免疫后 关键是诱导有效的体液免疫 ，产生具有保护作用的 病毒攻击试验，而HPV严格的种属特异性和组织特 中和抗体。目前已有多种检测中和抗体的方法，为疫 异性，使其又不能通过感染动物进行病毒感染保护 苗的实验室评价提供了重要手段。本文就 目前几种 性分析。Kreider等 于 1985年建立了裸 鼠异源组 中和试验方法的原理及其优缺点进行综述。 织移植模型。该模型原理为HPV能够体外感染分化 完全的上皮组织 ，将受感染的组织块移植入裸 鼠肾 1．体 内中和试验 包膜下，在这种环境下，HPV大量复制扩增 ，引起感 HPV具有严格的种属特异性和组织特异性，中 染组织增生，发生瘤样病变。1990年，该模型被应用 和试验缺乏合适的动物模型，同时病毒的复制与细 于HPV中和试验 ]，首次实现了在动物体 内评价 胞的分化状态密切相关，很难在体外组织培养系统 HPV中和抗体的保护作用。其检测过程是将待测血 中培养增殖。因此，动物体 内的中和试验只能选取以 清与HPV悬液及包皮组织块共孵育后，将包皮组织 实验动物为天然宿主的乳头瘤病毒。体内中和试验 块移植人裸 鼠肾包膜下培养，一段时间后取出移植 模型主要包括 3种：棉尾兔乳头瘤病毒(Cottonrab— 物，通过移植物的以下指标评价血清中和抗体水平： bitpapillomavirus，CRPV)感染兔的皮肤感染模型 ¨-2]， ①形态变化 ：若血清中无中和抗体，则移植物增大， 犬口腔乳头瘤病毒(Canineoralpapillomavirus，CORV) 表面有颗粒突起，呈菜花状 ，硬度增加，若血清中有 感染狗的黏膜感染模型以及牛乳头瘤病毒 4型 中和抗体 ，则形态无明显变化；②组织学鉴定 ：若血 (Bovinepapillomavirustype4，BPV．4)感染牛的黏膜 清中无中和抗体，则移植物发生增生性病变，若血清 感染模型。以兔的皮肤感染模型为例，将待测抗血清 中有中和抗体，则移植物呈正常上皮组织的分化特 作系列稀释后，与从Kansas野生棉尾兔乳头瘤中提 征；③RT—PCR分析：利用 RT．PCR的方法扩增移植 取的CRPV混合均匀，37℃共孵育 1h，均匀涂布至