高效液相色谱法测DL-丙氨酸中丙酸含量.docVIP

高效液相色谱法测DL-丙氨酸中丙酸含量摘 要：目的：高效液相色谱法测定DL-丙氨酸中丙酸的含量。方法：采用依利特C18柱，流动相为0.01mol/l磷酸二氢钾-甲醇 （84：16），流速为1.0ml/min；柱温温度为30℃检测。最低检测限为10ug/ml，理论塔板数为6703；结果：在5～40ug/ml范围内呈良好的线性关系。结论：该法测定丙酸的残留量简捷、准确。 关键词：丙酸；DL-丙氨酸；含量；高效液相法 DL-丙氨酸 是合成一些农药及医药的重要中间体，是制作维生素B6的原料 ，用于食品加工工业作营养增补剂、调味料用，还用于医药工业。DL-丙氨酸目前国内市场是由丙酸化学合成的 ，因此需检测其中的丙酸残留量。 1仪器与试剂 1.1仪器 色谱仪：Waters HPLC（郑州创宇科技有限公司 ） 色谱柱：依利特C18柱 250mm×4.6mm（粒径5?m）（大连依利特分析仪器） 1.2试剂 甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾（分析纯）、磷酸（分析纯）、三次重蒸水 2方法 2.1检测波长的选择 取丙酸制成适宜浓度，经紫外分光光度法扫描，紫外吸收曲线见图1，选择210nm处的波长作为检测波长。 图1丙酸的紫外吸收曲线图（210nm） 2.2供试品和对照品溶液制备 供试品溶液制备：精密称取DL-丙氨酸25mg于100ml量瓶中，加入流动相溶解摇匀定容，制得2.5mg/ml的供试品溶液。 对照品溶液的配制：精密称取丙酸50mg，置100ml量瓶中，用流动相定容，摇匀，作为对照品贮备液。精密移取5ml于100ml量瓶中，加流动相溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，浓度25μg/ml。 2.3色谱条件 2.3.1流动相筛选 为使杂质与主成分的分离度满足检查要求，根据色谱柱柱效情况，选择合适的流动相组成十分必要。根据丙酸的性质，我们对流动相进行了筛选。流动相筛选试验结果见表1。 表1 流动相筛选试验结果 经过试验并出于对色谱柱的保护，以0.01mol/l磷酸二氢钾-甲醇 （86：14）时，供试品溶液中主成分峰与各相关杂质的峰分离良好，主成分峰形好，未见明显拖尾。 2.3.2空白干扰实验 试验的对照品和供试品溶液均是用流动溶解稀释的，所以应排除流动相对样品检测的影响，故以流动相作为空白对照液。 在上述色谱条件下，取空白对照液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，空白溶液色谱图中有溶剂峰出现，主峰及杂质峰处无任何色谱峰出现，证实不干扰测定。 2.3.3色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以 0.01mol/l磷酸二氢钾-甲醇 （86：14）为流动相，检测波长为210nm，柱温为30℃。理论板数按丙酸计算6703，应不低于5000。结果见图2。 图2丙酸系统适应性图（tR=6.313min） 2.3.4最低检测限 取对照品溶液，逐步稀释，在上述色谱条件下分别进样，记录色谱图，测得最低检测限（S/N3）为0.02?g。 2.3.5线性关系试验 精密吸取上述对照品贮备液1.0ml、2.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml、8.0ml于100ml量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别制得浓度为5、10、20、25、30、35、40?g/ml的溶液。在上述色谱条件下分别进样20?l，记录色谱图，以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得回归方程Y=0.6038X-0.0626(R2=0.9997)，结果见表2。 表2 线性试验结果 2.3.6精密度试验 取线性关系试验项下第4点溶液(25?g/ml)，在上述色谱条件下，连续进样6次，所得峰面积的相对标准偏差结果见表3。 表3 精密度试验结果 2.3.7样品中溶剂残留测定 取供试品溶液，分别进样，记录色谱图，三批样品中各溶剂残留量测定结果见表4。 表4 样品溶剂残留检查结果 批号 080501 080502 080503 甲酸（%） 未检出 未检出 未检出 ICH规定丙酸为三类溶剂，限度为0.5%。样品检验结果显示均未检出，符合规定。 3 讨论 （1）在选定的色谱条件下，依利特C18柱的理论塔板数为6307，精密度试验的RSD为0.98（n=6），在范围内性线关系良好，可用于丙酸残留量的测定。 （2）由上述系列试验结果可知，用高效液相色谱法作为DL-丙氨酸中丙酸残留量的测定方法，其精密度高、线性关系良好符合要求，能够科学、合理、有效的控制残留丙酸的量。 参考文献 [1]王颖，李云政．D一丙氨酸的用途及制备方法[J]．辽宁化工，2003，32(2)：58-60． [2]俞志明．中国化