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结核菌特异性分泌蛋白的检测及其应用 252000 （ ）山东省聊城市人民医院中心实验室 陈双峰，刘伟，王凤菊，刘义华 近年来结核病疫情呈现上升趋势，是目前感染率和死亡率最高的传 染性疾病，对结核病的早期诊断及疗效观察的检测要求越来越高。目前 实验室主要依据结核菌的培养，抗酸染色和 PCR 方法，对血清中结核 1 抗体的临床检测结果褒贬不一 （ ）。 我们采用酶联免疫吸附试验检测血清及各种体液中的结核菌特异性 分泌蛋白，现报告如下： 对象与方法 一、 研究对象：结核病例组：2003 年 1 月至2005 年 6 月我院感染科 160例结核患者，均为初治患者，男 102例，女 58 例，年龄 13-61 岁。诊断标准以 《肺结核诊断和治疗指南》为标准。其中肺结核 126例， 结核性脑膜炎 14例，结核性胸膜炎 16例，结核性腹膜炎 4 例。对照 组：选择健康查体中胸透正常、无结核病史的健康人，男女各 20 例， 年龄 24-51 岁，平均 34 岁。 二、 方法 1、试剂 酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中特异性分泌蛋白试剂 由台湾杏恩科技有限公司提供。 2、标本采集与处理：采集所有受试对象（结核病患者在接受抗结核 治疗前）空腹静脉血 3ml，3000 转/min 离心，分离血清，-20℃ 保 存。然后采集受试者抗结核治疗后 24h、48h、96h、7 天、14天、30 天后 空腹静脉血 3ml，离心分离血清，-20℃ 保存。 3、测定 ELISA 检测按试剂盒说明书进行。具体过程如下：（1）取 100ul不同浓度的标准品及血清加入反应在孔中，25 ℃ 放置 1小时。 （2）冲洗3 次后，加入酶标记的抗体，25℃ 放置 1小时。（3）冲 洗 3 次后，加入TMB 显色液，20 分钟后，在所有孔内都加入 100ul 终止液，混匀后即用 Labsystems酶标仪 （芬兰制造）在450nm 处测 定各孔溶液的吸光度（A450）值。酶标仪内计算机自动读取并显示标 准曲线上与各吸光度 对应的浓度数值，cut off值吸光度为 0.42。 痰液及胸腹水抗酸染色按《全国临床检验操作规程》第二版进行操作。 结果 一、 160例结核患者血清结核菌特异性分泌蛋白（A 法）与抗酸染色 （B 法）检测结果见表1。160例结核患者经ELISA 方法检测血清中结 核菌特异性分泌蛋白阳性率为 93.1% （149/160），结核患者标本经 2 抗酸染色检测阳性率为 30.6% （49/160），经X 检验，二者有显著 性差异（P 〈0.01〉。 表1 160例患者血清结核菌特异性分泌蛋白与抗酸染色检测结果比 较 分组 例数 A 法检出率（%） B 法检出率（%） 结核组 160 93.1 （149/160）30.6 （49/160）* 对照组 40 0 0 注：*P 〈0.01 二、两种检测方法的敏感性和特异性比较：见表2。 表2 血清结核菌特异性分泌蛋白与抗酸染色法检测敏感度和特异 性的比较 方法 例数 敏感性（%） 特异性（%） A 160 30．6* 100 B 160 93．1* 93．9 *P 〈0.01 表2 显示，血清结核菌特异性分泌蛋白检测结核菌的敏感度为 93.1%，特异性为93.9%，与抗酸染色法相比有显