34株多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及β内酰胺酶基因分析.docVIP

　　34株多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及β内酰胺酶基因分析 【关键词】 铜绿假单胞菌； β内酰胺酶； 多重耐药 　　［Abstract］Objective: To investigate drug resistance pattern and βlactamase genic of multidrugresistant Pseudomonas aeruginosa, so as to provide reference for reasonable selection of antimicrobials. Methods： Antimicrobial susceptibility ethod). The βlactamase genes: TEM, SHV, VEB, PER carried on multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa erase chain reaction method(PCR). Results： The resistant rates of 34 strains multidrug Pseudomonas aeruginosa to 12 kinds of antimicrobials 20.5% to 100%. The positive rate of βlactamase genes TEM, SHV, VEB, PER expression ase ain type of Pseudomonas aeruginosa gene in our hospital. 　　［Key onas aeruginosa; βlactamase; multidrugresistant 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)广泛分布于 自然 界，是临床常见的条件致病菌之一，常引起肺部、泌尿系及烧伤创面感染。近年来PA在 医院 感染分离菌的分离率居首位，其耐药率不断升高，对多种抗生素表现出固有或获得性耐药，对3类或3类以上抗菌药表现耐药的多重耐药(multidrug resistant，MDR)的PA不断增加［1-5］。为了使临床能有效控制感染，对多重耐药菌耐药特征的研究成了人们关注的热点。现对我院2005年1月～2007年12月间部分多重耐药PA的耐药性及β内酰胺酶基因进行分析，报告如下。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验菌株的收集与筛选 　　收集2005年1月～2007年12月我院临床微生物科分离所得的PA，利用KB法筛选出多重耐药的菌株。根据NCCLS2005年标准进行敏感、中敏、耐药的判断，3类或3类以上抗菌药物耐药的菌株判为多重耐药PA。铜绿假单胞菌ATCC27853作为质控菌。共收集了34株，其中痰标本19株、尿标本2株、其他标本13株。全部细菌用法国生物梅里埃公司API鉴定系统鉴定到种。 　　1.1.2 仪器和材料 　　温箱、低温冰箱、PCR扩增仪和电泳仪等。MullerHinton(MH)琼脂为OXO IDE公司产品。 　　1.1.3 抗菌药物纸片 　　氨曲南(ATM)、头孢吡肟(FEP)、头孢他啶(CAZ)、头孢哌酮/舒巴坦(SCF)、头孢哌酮、亚胺培南(IPM)、庆大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、环丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LVX)、妥布霉素、磺胺甲恶唑/甲氧苄氨嘧啶(SXT)，均购自 中国 药品生物制品检定所。 　　1.2 方法 　　1.2.1 药敏 　　根据NCCLS2005年标准，用KB法对铜绿假单胞菌进行常规药敏试验。 　　1.2.2 PCR检测细菌β 　　内酰胺酶基因 检测模板提取：挑纯培养细菌菌落少许置入50 μl灭菌水中，置100℃水浴10 min，8 000 r/min 30 s，上清液即为DNA模板液。 根据 文献 ［6］和基因库检索，设计引物序列如下： TEMP1：5′GAGTATTCAACATTTCCGTGTC3′， TEMP2：5′TAATCAGTGAGGCACCTATCTC3′，扩增产物为535 bp； SHVP1：5′TGGTTATGCGTTATATTCGCC3′， SHVP2：5′GCTTAGCGTTGCCAGTGCT3′，扩增产物为865 bp； PERP1：5′ATGAATGTCATTATAAAAGC3′， PERP2：5′AATTTGGGCTTAGGGCAGAA3′，扩增产物为978 bp； VEBP1：5′CGACTTCCATTTCCCGATGC3′， VEBP2：5′GGACTCTGCAACAAATACGC3′，扩增产物为961 bp。引物由上海生工