CYP450在SAP组织中的表达及对临床治疗的指导意义.doc

　　CYP450在SAP组织中的表达及对临床治疗的指导意义 【关键词】 细胞色素P450 急性重症胰腺炎 肝脏 空肠 Abstract Objective：To investigate the dynamic expression of hepatic cytochrome P450(CYP450)in early severe acute pancreatitis(SAP).Methods：SAP taurocholate into the bilipancreatic duct，the activity of serum amylase munity histochemistry method odel of SAP 4 h，12 h and normal control ones in male rats.Results：CYP450 is fundamental expressed in endochylema.The expression of CYP450 ，liver are conspicuous higher than the normal control ones.Conclusion：It seemed that CYP450 plays a pivotal role in the development and clinical treatment of SAP. Key e P450；severe acute pancreatitis；liver；jejunum 近年来，随着人民生活水平的提高及生活饮食习惯的改变，急性胰腺炎的发病率呈明显上升趋势。急性重症胰腺炎(SAP)的确切发病机制尚未完全阐明，近年来的研究表明，CYP450(平均积分光密度)可能在SAP发病过程中有着重要作用。本研究采用牛黄胆酸钠制备大鼠SAP模型，通过观察肝脏及空肠组织中细胞色素P450蛋白的表达情况，并结合肝功能，拟系统探讨细胞色素P450的表达在SAP发生中的地位及其可能机制，以期进一步探明SAP的发病机制，并为临床干预提供重要线索。 1 资料与方法 1.1 一般资料 健康雄性SD大鼠，清洁级，体重250～300 g，由河北医科大学实验动物中心提供。CYP450单克隆抗体由北京博奥森生物工程有限公司提供，免疫组织化学试剂盒由山西医科大学寄生虫教研室提供。 1.2 动物模型的制备及分组 30只大鼠，随机分为3组，每组10只。假手术组(SO组)；SAP 4 h组；SAP 12 h组。其中假手术组直接手术取出相应组织。模型制作简要步骤：大鼠术前禁食禁水12 h，3％戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔内注射麻醉后，仰卧位固定于无菌手术台，消毒腹部皮肤，正中切口入腹，沿胃窦向下首先找到十二指肠，在其内侧见片状分布的胰腺组织及半透明的胰胆管汇入十二指肠乳头。肝门部胆管动脉夹夹闭后，从胆胰管开口十二指肠对系膜缘侧穿刺肠壁进入胆胰管开口后，于十二指肠乳头处用手指捏闭胆总管末端。经微量注射泵缓慢匀速(18 mL/h)注入3％牛磺胆酸钠(1 mL/kg)，注射时间1 min。5 min后去除动脉夹，局部压迫肠壁穿刺处，双层关腹。造模后所有动物均皮下注射生理盐水5 mL，以补充血容量不足。 1.3 血清淀粉酶检测 在各时间点处死大鼠，迅速入腹抽取下腔静脉血，分离血清，用于脂肪酶及淀粉酶测定。 1.4 表达测定 分别取三组大鼠的肝脏、空肠组织，置4％多聚甲醛中固定，石蜡包埋，行4 μm厚全层切片及HE染色，并采用免疫组织化学法检测肝脏、空肠组织中CYP450的表达。各组织切片常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化后滴加3％H2O2溶液10 min(去除内源性过氧化氢酶活性)，修复抗原(高压修复)， 自然 冷却至室温后依次按说明书完成免疫染色各步骤。用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。结果进行显微摄片，并用由山西医科大学生理教研室提供的医学图像分析系统对各组标本进行图像采集、预处理、图像分割、分析，每张切片在高倍镜下随机选择≥10个视野，以出现棕黄色染色为阳性信号，以均值表示每个视野CYP450(胞浆表达)的积分光密度。 2 结 果 2.1 血清淀粉酶 与SO组比较，SAP 4 h、12 h组血淀粉酶随时间延长有明显升高(P＜0.01)(见表1)。表1 各组大鼠血脂肪酶及淀粉酶损伤动态观察 2.2 胰腺组织病 理学 结果 肉眼观察：正常组大鼠胰腺、胰周脂肪、网膜均无异常，无腹腔积液；SAP组术后4 h大鼠胰腺明显肿胀，表面点片状出血，肝脏深红肿大，空回肠组织明显红肿，腹腔内中量血性腹腔积液；12 h组大鼠胰腺肿胀呈暗紫色，分叶结构模糊出现沿胰胆管及胰腺组织分布的点片状皂化斑。 镜下观察：SO组各