KIR在NK92MI及K562细胞中的基因型及表达谱分析.doc

　　KIR在NK92MI及K562细胞中的基因型及表达谱分析 ：窦立萍, 达万明, 刘景华, 孙敬芬, 赵瑜, 王全顺, 高春记, 于力 【摘要】 目的: 分析杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)在NK92MI及K562细胞中的基因型及表达谱, 探索KIR受体的表达调控 规律 。方法: 采用PCR、 RTPCR及分子克隆测序技术, 检测K562及NK92MI细胞中KIR2DL1、 2DL2、 2DL3、 2DL4、 2DL5、 2DS1、 2DS2、 2DS3、 2DS4、 2DS5、 3DL1、 3DL2、 3DL3、 3DS1、 2DP1、 3DP1的基因型, 及KIR2DL1、 KIR2DL2、 KIR2DL3、 KIR3DL1、 KIR2DS1、 KIR2DS3及KIR2DS2/4受体mRNA的表达。结果: K562细胞携带KIR2DL1、 2DL2、 2DL3、 2DL4、 2DL5A、 2DS2、 2DS4*003006、 2DS5、 3DL1、 3DL2、 3DL3基因, 但不表达KIR。NK92MI细胞携带KIR2DL1、 2DL2、 2DL3、 2DL4、 2DS2、 2DS4*001/002、 2DS4*003006、 3DL1、 3DL2、 3DL3, 但只表达KIR2DL1、 KIR2DL3及KIR2DS2/4。结论: K562细胞及NK92MI细胞均携带KIR2DL1、 2DL2、 2DL3、 2DL4、 2DS2、 2DS4*003006、 3DL1、 3DL2、 3DL3。NK92MI细胞表达KIR受体, K562细胞不表达上述KIR, KIR呈细胞特异性表达。 【关键词】 杀伤细胞免疫球蛋白样受体; 基因型; 表达谱 　　[Abstract] AIM: To make clear the repertoire of Killer immunoglobulinlike receptor at the level of DNA and RNA in NK92MI and K562 cells and pare KIRs gene genotype and expression patterns in both cells. METHODS: KIRs gene genotype, include KIR2DL1, 2DL2, 2DL3, 2DL4, 2DL5, 2DS1, 2DS2, 2DS3, 2DS4, 2DS5, 3DL1, 3DL2, 3DL3, 3DS1, 2DP1, 3DP1, ined by RTPCR and sequencing. RESULTS: KIR2DL1, 2DL2, 2DL3, 2DL4, 2DL5A, 2DS2, 2DS4*003006, 2DS5, 3DL1, 3DL2 and 3DL3 gene munoglobulinlike receptor; genotype; expression pattern 杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer immunoglobulinlike receptor, KIR)家族是决定人NK细胞活性的一类重要的受体, 在先天免疫耐受及后天免疫应答中发挥调控作用, 其在异基因造血干细胞移植免疫中的作用也越来越为临床医生所重视[1]。KIR基因呈高度多态性, 在NK细胞及T细胞表面呈克隆性、 随机性分布, 其表达调控机制是近年来分子免疫学领域研究的热点[2]。本研究分析了不同细胞中KIR的基因型及表达谱, 探索 KIR的表达调控规律。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材料 K562及NK92MI细胞系由本室保存。TRIzol及RPMI1640培养基为Invitrogen公司产品。超级小牛血清购自杭州四季青生物材料厂。DNA提取试剂盒、 MMLV反转录酶、 Oligo(dT)15、 RNA酶抑制剂为Promega公司产品。Taq DNA酶、 dNTP购自大连宝生物公司。DNA测序由上海生物工程公司完成。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞DNA提取 采用 Promega I细胞KIR各受体RTPCR产物克隆入PGEMT载体(Promega公司产品), 导入DH5α感受态大肠杆菌(博大泰克公司产品), 挑选单个阳性克隆, 送上海生工测序。各加样孔至少出现一条内参照条带, 若出现两条或三条条带该孔扩增结果为阳性。 　　2.2 K562细胞和NK92MI细胞KIR表达谱分析 RTPCR结果显示, NK92MI表达KIR2DL1、 KIR2DL3、 KIR2DS3及KIR2DS2/4(图3)。K562细胞在RTPCR检测中不表达KIR。 　　2.3 NK92MI细胞KIR受体测序